酶的专一性实验报告.docx

酶的专一性实验报告实验报告课程名称:生物化学实验指导老师:成绩:实验名称:酶的基本性质实验——底物专一性剂、激活剂和抑制、最适温度实验类型:分离鉴定实验同组学生姓名:一、实验目的和要求三、主要仪器设备五、实验数据记录和处理七、讨论、心得二、实验内容和原理四、操作方法和实验步骤六、实验结果与分析Ⅰ.酶的基本性质——底物专一性一、实验目的和要求 。。,设计酶学实验。二、实验基本原理酶是一种具有催化功能的蛋白质。酶蛋白结构决定了酶的功能——酶的高效性,酶催化的反应要比相应的没有催化剂的反应快103-1017倍。酶催化作用的一个重要特点是具有高度的底物专一性,即一种酶只能对某一种底物或一类底物起催化作用,对其他底物无催化反应。根据各种酶对底物的选择程度不同,它们的专一性可以分为下列几种: 。:有些酶对底物的要求非常严格只作用于一种底物,而不作用于任何其他物质。如脲酶只能催化尿素进行水解而生成二氧化碳和氨。如麦芽糖酶只作用于麦芽糖而不作用其它双糖,淀粉酶只作用于淀粉,而不作用于纤维素。,而对另一种则全无作用。如酵母中的糖酶类只作用于D-型糖而不能作用于L-型的糖。本实验以唾液淀粉酶、蔗糖酶对淀粉、蔗糖水解反应的催化作用来观察酶的专一性。采用Benedict试剂检测反应产物。 Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液,具有一定的氧化能力,能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应,生成砖红色氧化亚铜沉淀。Na2CO3+2H2O2NaOH+H2CO3CuSO4+ 2+Na2SO4还原糖(—CHOor—C=O)+2Cu(OH)2Cu2O(砖红色或黄色)+2H2 与Benedict试剂无呈色反应。淀粉被淀粉酶水解,产物为葡萄糖;蔗糖和棉子糖被蔗糖酶水解,其产物为果糖和葡萄糖,它们都为具有自由半缩醛羟基的还原糖,与Benedict试剂共热,即产生红棕色Cu2O沉淀。本实验以此颜色反应观察淀粉酶、蔗糖酶对淀粉和蔗糖的水解作用。三、实验材料与试剂 1、实验材料⑴蔗糖酶(样品Ⅳ);⑵新鲜唾液;2、实验试剂⑴蔗糖酶液蔗糖酶液(样品Ⅳ)加蒸馏水适当稀释,备用;⑵唾液淀粉酶液取唾液至25ml量筒中,用蒸馏水到25ml,用棉花过滤备用。唾液稀倍数因人而异,可稀释50~ 400倍,甚至更高;⑶5%蔗糖溶液;⑷%淀粉溶液;⑸Benedict试剂;四、实验器材与仪器 ,;;;;;。五、实验操作方法和步骤㈠检查试剂取3支试管,按下表操作: 注:1、检查目的:试剂是否有干扰因素存在。2、也可对蔗糖酶液、唾液淀粉酶液进行检查是否也有干扰因素存在,请自己设计。㈡淀粉酶的专一性取三支试管,按下表操作: 注:可增加一组唾液淀粉酶液经100℃加热3min 处理后的样品对照组。㈢蔗糖酶的专一性取三支试管,按下表操作: 注:可增加一组蔗糖酶液经100℃加热3min处理后的样品对照组。六、结果分析讨论各试管观察结果依次是: :1号蓝绿色,2号蓝色,3号蓝色 Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液,具有一定的氧化能力,能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应,生成砖红色氧化亚铜沉淀。3只试管都为蓝色说明几只试管中都没有果糖和葡萄糖,说明在不加酶时,淀粉和蔗糖不易水解。试剂无干扰因素的存在。:1号土黄色,2号黄绿色,3号蓝色加入唾液淀粉酶,1号试管底物是淀粉,所以很容易水解成葡萄糖,与Benedict试剂共热,即产生红棕色Cu2O沉淀。所以1号颜色变化比较大。总的来看可以看出唾液淀粉酶只对淀粉有催化活性,不能催化蔗糖水解,具有对淀粉的底物专一性。3号是对照。:1号蓝色,2号红棕色,3号蓝色加入蔗糖酶,2号试管底物是蔗糖,所以很容易水解成果糖和葡萄糖,与Benedict试剂共热,即产生红棕色Cu2O沉淀。所以2号颜色变化比较大。从这三支试管看出蔗糖酶只对蔗糖的水解有催化作用,对淀粉无催化作用,具有对蔗糖的底物专一性。3号是对照。七、?每组各有何意义?蒸馏水有何用?第一组作为整个实验的空白对照组,检测Benedict试剂对实验结果的颜色有何影响,排除干扰因素的存在。第二组作为检测淀粉酶的专一性实验组,第三组作为检测蔗糖酶的专一性的实验组。蒸馏水作为每一个组中的空白对照,与组内其余两组进行对照。 ,重做二、三的操作,观察有何结果? 各试管都为蓝色,因为酶在煮沸过程中已经变性,失去催化活性,故不能催化各自对应底物的水解反应。 ,为什么