昆虫sf9细胞培养.docx

Sf9培养要点:温度:27-28摄氏度pH:,,随培养时间的延长,Ph值会增加传代时间:72h(三天左右)细胞来源:Sf9(货号B825-01)和Sf21(货号B821-01)细胞系是传统的用于杆状病毒表达的细胞系,源于美国农业部昆虫病理实验室。此细胞系适用于InsectSelect系统。这两株细胞衍生于IPLBSF-21细胞系,来源于秋蝇蠕虫(草地夜蛾)蛹的卵巢组织。(以上来自invitrogen)细胞特点:规则的带有颗粒球形。贴壁紧。标准条件的定义:培养最低密度:×106/ml(健康对数生长期细胞活率至少应不低于90%。活率低于90%细胞不是在最佳条件下培养不能用于实验)1×106/mL将出现对数生长状态传代培养:传代培养需将细胞调整到维持对数生长状态和最大活率。贴壁培养:贴壁细胞传代需在细胞长成单层(如下定义)然后1:5(细胞体积:最后培养基体积)稀释维持对数生长。形成单层细胞可以传代培养悬浮培养:×106-×106细胞/×106-×106细胞/mL进行悬浮传代。确保传代细胞密度不高于4×106个/mL或保持密度高于1×106个/mL以达到对数生长状态。Sf9悬浮培养所需要的细胞数培养基:sf-900ⅢSFM(添加2%的血清减小感染过程中蛋白水解量)培养瓶与培养体积:冻存:一旦细胞系建立且倍增规律则可以进行冻存。细胞需达到90%活率和80-90%融合的要求(如:低代次)推荐冻存几管。当融解细胞,它将会达到最佳使用状态。。需要足够的如上表所示密度的细胞冻存2-4管。细胞可是悬浮或贴壁培养;,做好标记;-600×g离心10min。移除上清。;;-20℃1h,然后移至-80℃24-48h;。转染的细胞:需要的是对数期的细胞>95%发育能力,可以完成成功的转染。载氧:对