昆虫sf9细胞培养.docx

Sf9 培养要点: 温度: 27-28 摄氏度 pH :, sf9 最适的 ,随培养时间的延长, Ph 值会增加传代时间: 72h (三天左右) 细胞来源: Sf9 ( 货号 B825-01 )和 Sf21 ( 货号 B821-01 ) 细胞系是传统的用于杆状病毒表达的细胞系,源于美国农业部昆虫病理实验室。此细胞系适用于 InsectSelect 系统。这两株细胞衍生于 IPLBSF-2 1 细胞系, 来源于秋蝇蠕虫( 草地夜蛾) 蛹的卵巢组织。( 以上来自 invitrogen ) 细胞特点:规则的带有颗粒球形。贴壁紧。标准条件的定义: 培养最低密度: ( 健康对数生长期细胞活率至少应不低于 90%。活率低于 90 %细胞不是在最佳条件下培养不能用于实验) 1× /mL 将出现对数生长状态传代培养:传代培养需将细胞调整到维持对数生长状态和最大活率。贴壁培养: 贴壁细胞传代需在细胞长成单层( 如下定义) 然后 1:5( 细胞体积: 最后培养基体积)稀释维持对数生长。形成单层细胞可以传代培养悬浮培养: 在细胞密度达到 × - × 细胞/mL 后将密度调整至 × - × 细胞/mL 进行悬浮传代。确保传代细胞密度不高于 4×个/mL 或保持密度高于 1×个/mL 以达到对数生长状态。 S f9 悬浮培养所需要的细胞数培养基: sf-900 Ⅲ SFM (添加 2% 的血清减小感染过程中蛋白水解量) 培养瓶与培养体积: 冻存: 一旦细胞系建立且倍增规律则可以进行冻存。细胞需达到 90 %活率和 80-90 %融合的要求(如:低代次)推荐冻存几管。当融解细胞,它将会达到最佳使用状态。 1. 用细胞计数板计数细胞。需要足够的如上表所示密度的细胞冻存 2-4 管。细胞可是悬浮或贴壁培养; 2. 将无菌冻存管立于冰上,做好标记; 3. 室温 400-600 ×g 离心 10min 。移除上清。 4. 以给定的密度在冻存液中重悬细胞; 5. 移取 1mL 细胞悬液置于无菌冻存管中; 6. 置于-20 ℃ 1h ,然后移至-80 ℃ 24-48h ; 7. 储存于液氮中。转染的细胞: 需要的是对数期的细胞> 95% 发育能力,可以完成成功的转染