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柴胡疏肝散抗肝纤维化的实验研究
作者:付德才杨世忠宋祥福
【摘要】目的探讨柴胡疏肝散对肝纤维化大鼠模型αSMA、TGFβ1的影响及其抗纤维化的机制。方法采用40% CCl4皮下注射,制备肝纤维化模型并以柴胡疏肝散干预,测定肝功能、血清透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)及肝组织羟脯氨酸(HYP),光镜观察肝组织病理变化,免疫组织化学法检测肝组织αSMA、TGFβ1表达,RTPCR 检测TGFβ1 mRNA 的表达。结果柴胡疏肝散组较模型组:肝功能明显改善,血清HA及LN显著降低,肝组织HYP含量明显少,肝组织纤维化程度明显改善,肝组织αSMA及TGFβ1表达减少。结论 l4 诱导的大鼠肝纤维化有良好的防治作用。
【关键词】柴胡疏肝散;肝纤维化;αSMA;TGFβ1
近年来柴胡疏肝散抗肝纤维化的临床研究取得了较好的临床效果〔1〕,但目前国内外尚无柴胡疏肝散抗肝纤维化的基础研究。l4)大鼠肝纤维化模型,观察柴胡疏肝散的抗肝纤维化作用,并探讨其对α平滑肌肌动蛋白(αSMA)、转化生长因子(TGFβ1)影响及柴胡疏肝散抗肝纤维化的理论机制。
1 材料与方法
11 材料
111 动物及药物雄性22月龄Wistar 大鼠60 只,体重300~350 g,由吉林大学实验动物中心提供。柴胡疏肝散(柴胡6 g,陈皮6 g,川芎5 g,香附5 g,枳壳5 g,赤芍5 g,甘草3 g,由长春中医药大学附属医院提供) 经冷水浸泡药材2 h,常规两煎,头煎1
5 h,二煎1 h,两次水煎液混合并过滤,经水浴蒸发浓缩成含生药112 g/ml的浓缩药液冷藏备用。按体表面积折算,大鼠每天的柴胡疏肝散等效剂量为28 g/kg(体重) 。
112 l4购自北京北化精细化学品有限责任公司);秋水仙碱(colchicine) 购自昆明股份制药有限公司;谷丙转氨酶、谷草转氨酶试剂盒购自上海科欣生物技术研究所;血清总胆红素(TBIL)试剂盒购自上海科华东菱诊断用品有限公司;透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)放射免疫分析测定盒购自上海海军医学研究所生物技术中心;单克隆急用型鼠抗人生αSMA试剂盒购自北京中杉生物公司,兔抗大鼠TGFβ1多克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司,即用型SP免疫组化试剂盒购自福州迈新试剂公司,DAB购自北京中山生物公司,RTPCR两步法试剂盒购自TAKARA公司,Trizol购自Sangon公司。
12 方法
121 模型制作参照文献〔2〕方法:实验第1 天除正常空白对照组(对照组) 外,l4 分析纯05 ml/100 g (体重),以后每隔3 d注射40% CCl4 橄榄油剂03 ml/100 g(体重),连续8 w。实验前2 w饲喂高脂玉米粉饲料(795%玉米粉+20%猪油+05%胆固醇),第3~6周饲喂100%玉米粉和30%乙醇饮料。
122 分组及给药方法将60 只大鼠随机分为4组,每组15只,第1组对照组,饲喂正常饮食;第2组模型组,按上述造模方法给予饮食;第3组柴胡疏肝散治疗组,于造模3 w开始,给予柴胡疏肝散煎剂灌胃,每日2
8 g/kg;第4组秋水仙碱组,于造模3 w开始给予秋水仙碱01 mg/(kg·d)-1,共8 w。
12