氨基酸薄层层析 实验报告.doc

生物化学实验报告姓名:学号:专业年级:组别:。。(Rf值)来鉴定被分离的物质(即氨基酸混合液)。二、。当液相(展开溶剂)在固定相上流动时,由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样,不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样,点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同,因而可以彼此分开。(即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行,而将样品各组分分离开来)。***的显色反应茚三***水化后生成水化茚三***,它与氨基酸的羧基反应生成还原茚三***、氨及醛,与此同时,还原茚三***又与氨及茚三***缩合生成紫红化合物而使氨基酸斑点显色。—Rf值来表示。层析中,物质沿溶剂运动方向迁移的距离与溶液前沿的距离之比为Rf值。由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的,故移动速率(Rf值)也是恒定的,因此可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。(Rf=斑点至原点距离/溶剂前缘至原点距离)三、材料与方法:::①分析样品:氨基酸混合液;②吸附剂:硅胶;③粘合剂:%的羧***纤维素钠;④氨基酸的异丙醇溶液;⑤丙氨酸、精氨酸、甘氨酸;⑥展开-显色剂(正丁醇、乙酸、水、茚三***溶液):①层析板、尺子、铅笔;②烧杯、玻棒、量筒;③吹风机;④毛细管、层析缸;⑤药匙;⑥::①调浆:称取硅胶3克,%的羧***纤维素钠8毫升,调成均匀的糊状;②涂布:取洁净的干燥玻璃板均匀涂层;③干燥:将玻璃板水平放置,室温下自然凉干;④活化:70℃烘干30分钟。切断电源,待玻璃板面温度下降至不烫手时取出。:①位置:用铅笔距底边2cm水平线上均匀确定4个点。每个样品间相距约1cm;②取样:用毛细管分别吸取氨基酸溶液,取样量为毛细管柱高5cm;③点样:点样毛细管轻轻接触薄层表面点样。加样后原点扩散直径不超过2mm。:将薄层板点样端浸入展层-显色剂,展层-显色剂液面应低于点样线。盖好层析缸盖,上行展层。当展层剂前沿离薄板顶端2cm时,停止展层,取出薄板,用铅笔描出溶剂前沿界线,用热风吹干或在85℃下烘干,即可显出各层斑点。:小心量出斑点中心至原点中心距离,再量出原点中心至溶剂前沿的距离,计算出它们的Rf值。根据Rf值,鉴定出混合样品中氨基酸的种类,并绘出层析图谱。:①切勿用手直接接触薄层板面;②点样过程中必须在第一滴样品干后再点第二滴;③样品量太少,有的成分不易显示;样品量太多,易造成斑点过大,互相交叉或拖尾。四、结果与讨论:-原点溶剂前缘-