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氨基酸薄层层析实验报告
篇一:生物化学实验-氨基酸分析实验报告
【实验报告第一部分(预****报告内容):①实验原理、②实验材料(包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材)、③实验步骤(包括实验流程、操作步骤和注意事项);评分(满分30分):
XX
】
一、预****报告
? 实验原理:
根据固定相基质的形式,层析可分为纸层析、薄层层析和柱层析。薄层层析是在玻
璃或塑料等光滑表面铺一层很薄的基质进行层析。
薄层层析(thin layer chromatography,TLC):是将吸附剂均匀地在玻璃板上铺成薄层(固定相),再把样品点在薄层板一端,再把板的这端浸入适当的溶剂(流动相)在薄层板上扩展。并在此过程中通过吸附——解吸附——再吸附——再解吸附的反复进行,而将样品各组份分离出来。
本次实验:
? 具体原理:当流动相在固定相上流动时,由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不
一样,不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样,点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同,因而可以彼此分开。
? 吸附剂(固定相):硅胶(.)。为使制成的薄层板不易松散,加入5%羟***
纤维素钠(a)作黏合剂。
? 展开剂:正丁醇、冰醋酸和蒸馏水的混合液(80:10:10,V/V/V)。? 展层-显色剂:按照10:1比例(V/V)%茚三***溶液。? 活化(activation):在一定温度下,对吸附剂硅胶加热去除水分。可使硅胶的
活性提高,吸附能力加强。
? 氨基酸与茚三***的显色反应:茚三***水化后生成的水合茚三***在加热时被还原,
此产物与氨基酸加热分解产生的氨结合,以及另一分子水合茚三***缩合生成紫红色化合物而使氨基酸斑点显色。? Rf值:
Rf?
斑点中心到样品原点的距离
对应溶剂前沿到样品原点的距离
由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的,故移动速率(Rf值)也是恒定的,
因此可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。?
实验材料:
? 样品:
1、; 2、 ; 3、; 4、混合氨基酸溶液。? 试剂: 1、硅胶(.)
2、%羟***纤维素钠(a)
3、层展-显色剂:按照10:1比例(V/V)混匀的展开剂(正丁醇、冰醋酸和蒸馏水的混合液(80:10:10,V/V/V))%茚三***溶液。? 仪器及器材: 1、层析版(6cm×15cm) 2、小烧杯 3、量筒(10ml) 4、刻度尺 5、铅笔 6、毛细玻璃管 7、层析缸 8、烘箱 9、天平 10、药匙
?
实验步骤:
? 实验流程:
?
操作步骤: ? 注意事项:
1、玻璃板要清洁平整无油污;2、去掉玻璃板侧缘的硅胶粉,否则层析时会有较强的边缘效应;3、点样时轻触疾起,避免重复点样和斑点过大产生交叉和拖尾;4、毛细玻璃管用完放回原来的烧杯里;5、避免用手接触层析板,避免用手握层析板的下半部分;6、层析板放入层析缸时底端应放置水平,以防倾斜放置使展层方向与薄板下缘不垂直,不好处理数据;7、样点不能浸入到溶液中;8、层析缸盖应作密封处理防止挥发。
【实验报告第二部分(实验记录):①主要实验条件(如材料的来源、质量;试剂的规格、用量、浓度;实验时间、操作要点中的技巧、失误等,以便总结实验时进行核对和作为查找成败原因的参考依据);②实验中观察到的现象(如加入试剂后溶液颜色的变化);③原始实验数据。评分(满分20分):
XX】
二、实验记录
(一共做了两组实验,以作对照)
? 主要实验条件:
? 材料: 1、硅胶(.)
2、玻璃板。要求干净干燥。? 试剂:
1、%的羧***纤维素钠8ml
2、、精氨酸、甘氨酸、混合氨基酸溶液。各取毛细管2cm高左右,扩散不超2mm
3、展层-显色液,层析缸内深度1-2cm ? 操作要点:
1、制板时,尽量快地将混合匀浆倒在玻璃板上,易于铺匀。
2、层析板晾干时尽量保持水平,避免强风猛吹,否则制作的板厚薄不均。 3、活化时烘干以背面无水渍为准。 4、点样时要轻触疾起。
5、点样完毕将层析板放入层析缸时,要保持层析板下缘水平。 6、展层-显色剂液面应低于点样线,展层剂前沿大概跑到1/2处时取出
7、避免手触碰层析板和点样端边缘。
篇二:氨基酸的薄层层析
实验4氨基酸的薄层层析
一、实验原理
薄层层析是一种将固定相在固体上铺成薄层进行层析的方法。由于该方法具有操作简便、层析展开时间短、灵敏度高、结果可视化等优点,已被广泛应用于生物化学、医药卫生、化学工业、农业生产和食