小鼠丙氨酸转氨酶谷丙转氨酶altgpt.doc

小鼠丙氨酸转氨酶谷丙转氨酶ALTGPT/(ALT/GPT)产品编号:LIFE供体外研究使用、不用于临床诊断!ELISA法定量测定小鼠血清、血浆或其它相关生物液体丙氨酸转氨酶/谷丙转氨酶(ALT/GPT)含量。用纯化的ALT/GPT抗体包被微孔板,制成固相载体,往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的ALT/GPT抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物(TMB)显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的ALT/GPT呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(值),计算样品浓度。1、一块(96孔)2、(冻干品):2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至1ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为500U/L,将其稀释为100U/L后,然后做系列倍比稀释,分别配制成100U/L,50U/L,25U/L,,,,,样品稀释液直接作为空白孔0U/L。如配制50U/L标准品:()100U/,混匀即可,其余浓度以此类推。3、:1×20ml。4、:1×10ml。5、:1×10ml。6、:1×120/瓶(1:100)。临用前以1:100稀释(如:10检测溶液A/990检测稀释液A),充分混匀,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100/孔),-。7、:1×120/瓶(1:100)。临用前以1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。8、:1×10ml/瓶。9、:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。10、:1×10ml/瓶(2mol/LHSO)。2411、:5张12、1份1、酶标仪(建议仪器使用前提前预热)2、微量加液器及吸头,EP管3、蒸馏水或去离子水,滤纸1、血清:全血标本请于室温放置2小时或4过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20或-80保存,但应避免反复冻融。2、血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于1000g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20或-80保存,但应避免反复冻融。3、其它生物标本:请1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20或-80保存,但应避免反复冻融。实验开始前,各试剂均应平衡至室温,试剂不能直接在37溶解;试剂或样品配制时,均需充分混匀,混匀时尽量避免起泡。计算时再乘以相应的稀释倍数。1、加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100,余孔分别加或待测样品100,注意不要有气泡,加样时将样品加于酶标板底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37温育2小时。2、弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加100(临用前配制),酶标板加上覆膜,37温育1小时。3、弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。4、每孔加(临用前配制)100,加上覆膜,37温育1小时。5、弃去孔内液体,甩干,洗板5次,方法同步骤3。6、每孔加90,酶标板加上覆膜37(反应时间控制在15-30分钟,当标准孔的前3-4