PCR在HIV感染应用研究中的应用.doc

.页眉. .页脚. PCR 在 HIV 感染研究中的应用?前言简介 HIV 与 PCR 技术?主体内容一、 HIV 的基因结构二、 PCR 在鉴定 HIV 感染中的意义三、 HIV 感染的定量 PCR 研究四、 PCR 的相关问题五、实例?结语?前言八十年代以来由人类免疫缺陷病毒 HIV ( Human Immunodeficiency Virus) 感染而引起的艾滋病( AIDS )因其严重的危害性而受到人们高度重视。图一: HIV 图二: HIV 力争早期诊断和寻求有效治疗是防止其广泛传播的关键所在。聚合酶链式反应(polymerase chain reaction , PCR) 1985 年, Mallis 等根据核酸自然扩增理论, 建立了一种人工体外 DNA 扩增技术, 即聚合酶链式反应, 并于 1987 年完成了自动化操作, 极大地推动了分子生物学的发展, 也为包括病毒感染在内的临床疾病诊断提供了一种崭新的手段。 1、 PCR . .页脚. 靶 DNA 分子变性后解链,两条单链 DNA 分别经复性与两条引物互补结合,在 4种 dNTP 存在和合适的条件下,由 DNA 聚合酶催化引物由 5’- >3 ’扩增延长,每经过变性、复性、延伸一个循环, 模板 DNA 增加 1倍, 新合成的 DNA 链又可作为下一个循环的模板, 经过 30 ~ 50 个循环,可使原 DNA 量增加 106 ~ 109 倍。 2 、主要步骤 PCR 的每一循环包括变性、复性、延伸 3 个步骤, 此外整个试验应包括 DNA 模板提取,如果模板为 RNA , 还需增加从 RNA 到 DNA 的逆转录过程。除模板提取外, 这些操作均可在同一系统中完成,仅仅改变反应温度即可完成。 3 、引物的设计 4 、常用的 PCR 技术(定量 PCR 等) 5、 PCR 产物的分析(凝胶电泳等方法) PCR 具有敏感、特异和快速的特点,是检测艾滋病病毒、评价病情进展和探讨发病机理的有效工具。本文将就目前 HIV 与 PCR 研究的现状,谈谈 PCR 技术在 HIV 研究中的应用。一、 HIV 的基因结构 HIV 的基因结构与其它逆转录病毒基本相同,为 RNA 双分子, 其单链 RNA 分子由 9749 个核苷酸组成,有 3 组共 9 个基因。 HIV 的模式图第一组为逆转录病毒共同的基因: gag 、 pol 、 env 基因,及侧翼的长末端重复顺序( LTR ) 等。第二组为调节基因表达的基因: tat 、 rev 、 nef 。第三组为特有基因: vif、 vpu 、 vpr .页眉. .页脚. HIV 基因组的蛋白产物 HIV 有十分高的遗传变异率,是一个多态性病毒。高度变异区在 env 基因内,相当于 gp12 0 的五个区段, gag 和 pol 基因较少变异。目前已知 HIV 有两个型: HIV-1 和 HIV-2 。因此, 只有选择病毒基因组中高度保守区域作为目的基因加以扩增, 才能有效地检测所有 HIV 的变异性。二、 PCR 在鉴定 HIV 感染中的意义 HIV 常可引起潜伏感染,但仍具有传染性,整合的病毒基因组在每个细胞中仅以很低的 DN A 拷贝数存在,因此,需要建立一个敏感而又特异的 HIV 检测方法。传统的 HIV 检测方法?病毒体外培养法?逆转录