2021年葡萄组织培养中愈伤组织的诱导-组织培养愈伤组织诱导.docx

葡萄组织培养中愈伤组织的诱导:组织培养愈伤组织诱导
摘要：采取三原因萘乙酸ＮＡＡ，吲哚丁酸ＩＢＡ，６－苄氨基嘌呤６－ＢＡ四水平的正交试验设计，对“鄞红”葡萄近梢处的嫩茎段和幼果进行愈伤组织诱导试验。结果表明，６－ＢＡ对愈伤组织诱导影响最大。以嫩茎段为外植体的最好培养基配方是ＭＳ＋1．00 ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．１0 ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋ ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ，其诱导率为７０．００％。以幼果为外植体的最好培养基配方是ＭＳ＋０．８0 ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．１0 ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋０．２0 ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ，诱导率为６１．８５％。嫩茎段是“鄞红”葡萄愈伤组织诱导最理想的外植体。
　　关键词：葡萄；嫩茎；幼果；愈伤组织诱导；正交设计
　　中图分类号：Ｓ６６３．１；Ｑ８１３．１＋２文件标识码：Ａ文章编号：0439－８114２０1204－0827-03
　　葡萄是多年生落叶藤本浆果类果树，属葡萄科Ｖｉｔａｃｅａｃｅ葡萄属Ｖｉｔｉｓ Ｌ．植物［１］。其常规栽培繁殖方法为扦插和嫁接，长久采取造成葡萄品种退化，病害感染率高，严重影响果实产量和品质［２，３］，而组织培养能够达成缩短育种周期、减轻病害和快速繁殖的目标［４］。葡萄叶片和叶柄再生比较困难［１］。李云等［５］对“红地球”葡萄叶片及叶柄进行不定芽诱导，石雪晖［６］对藤稔葡萄叶片、茎段、叶柄和卷须进行离体培养，其诱导率和不定芽分化率均不高。试验所选材料为“鄞红”葡萄，属欧美杂种Ｖ． ｖｉｎｉｆｅｒａ Ｌ．×Ｖ． ｌａｂｒｕｓｃａ Ｌ．，在浙江省栽培范围较广，现在还鲜相关于此品种的组织培养研究报道。经过采取正交试验设计，筛选葡萄愈伤组织诱导的最好激素浓度配比，以期为该葡萄品种的组织培养和快速繁殖提供有效路径和方法。
　　１材料和方法
　　１．１材料
　　材料取自宁波市江北绿艳果蔬专业合作社葡萄试验基地，以“鄞红”葡萄的嫩茎段和幼果作为外植体。
　　１．２方法
　　１．２．１外植体消毒先用自来水洗去外植体表面残留物质，在洗洁精中浸泡１０ ｍｉｎ，再用自来水充足清洗，并用无菌水洗涤一次。然后在体积分数为７０％的乙醇溶液中浸泡４０ ｓ，用无菌水冲洗２～３次，再用1 g/L的HgCl2对外植体处理７ ｍｉｎ，并用无菌水洗涤５～６次。将消毒处理的外植体放在事先灭好菌的滤纸上吸干表面水分，把消过毒的伤口剪掉，然后接种于培养瓶中。
　　１．２．２试验设计和培养条件于２００９年５月１６日对“鄞红”葡萄近梢处的嫩茎段和幼果进行愈伤组织诱导试验。以ＭＳ为基础培养基，附加２０ ｇ／Ｌ蔗糖，７ ｇ／Ｌ琼脂，ｐＨ为５．８～６．０。采取三原因萘乙酸ＮＡＡ，吲哚丁酸ＩＢＡ，６－苄氨基嘌呤６－ＢＡ四水平的正交试验，即Ｌ１６４３正交设计表１，进行愈伤组织诱导试验。每个处理接种２０瓶，每瓶６个外植体，反复３次。培养条件为温度２５ ℃，光照时间１２ ｈ／ｄ，光照度２ ０００ ｌｘ，培养７周。
　　１．２．３统计方法接种后，每隔５～７ ｄ观察统计愈伤组织的生长情况，至２００９年７月１５日统计愈伤组织的诱导率、颜色和质量。数据处理使用ＤＰＳ系统软件对试验结果进行方差分析和显著性检验［７］。
　　２结果和分析
　　２．１不一样激素配比对嫩茎段愈伤组织诱导的影响
　　６－ＢＡ、ＮＡＡ、ＩＢＡ对嫩茎段愈伤组织诱导