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溶菌酶实验-实验报告-第七组
溶菌酶的提取和系列性质测定
实验报告
学院： 生物科学与工程学院
班级：
姓名：
学号： 结构差异。
　　SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统，于连续缓冲系统相比，能够有较高的分辨率。
　　浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选TRIS/HCL缓冲液，电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后，HCL解离成***离子，甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷，因此一起向正极移动，其中***离子最快，甘氨酸根离子最慢，蛋白居中。电泳开始时***离子泳动率最大，超过蛋白，因此在后面形成低电导区，而电场强度与低电导区成反比，因而产生较高的电场强度，使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动，形成以稳定的界面，使蛋白聚集在移动界面附近，浓缩成一中间层。

　　此鉴定方法中，蛋白质的迁移率主要取决于它的相对分子质量，而与所带电荷和分子形状无关。
具体实验内容
一、实验目的
1、提取鸡蛋清中的溶菌酶
2、测定蛋白质浓度
3、测定溶菌酶的酶活力
二、实验仪器及材料
1、仪器：柱层析系统〔层析柱，恒流泵，紫外监测仪，局部收集器〕，Sigma高速冷冻离心机，722s分光光度计，透析袋，水浴锅，电泳仪，电泳槽，紫外凝胶成像系统，移液枪〔1000ml,200ml,100ml〕，烧杯，玻璃棒，容量瓶，移液管，洗耳球，
2、材料：新鲜鸡蛋。
3、试剂：
〔1〕弱酸性阳离子交换树脂；〔2〕磷酸氢二钠；〔3〕磷酸二氢钠；〔4〕***化钠；〔5〕硫酸铵；〔6〕氢氧化钠；〔7〕甘油；〔8〕盐酸；〔9〕葡聚糖凝胶G-50；〔10〕溶壁微球菌干粉；〔11〕考马斯亮蓝G-250；〔12〕95%乙醇；〔13〕85%磷酸；〔14〕牛血清清蛋白(BSA)；〔15〕脲；〔16〕丙烯酰***〔Acr〕；〔17〕甲叉双丙烯酰***〔Bis〕；〔18〕四***乙二***〔TEMED〕；〔19〕甘氨酸(Gly)；〔20〕过硫酸铵〔AP〕；〔21〕考马斯亮蓝R-250；(22)三羟***氨基甲烷〔Tris〕；〔23〕2-β-巯基乙醇；〔24〕十二烷基磺酸钠〔SDS〕；〔25〕溴酚蓝；〔26〕冰醋酸；〔27〕
标准蛋白：SDS-低相对分子质量标准蛋白.
4、试剂配制
(1) ，；
(2) NaOH；200ml
(3) HCl；200ml
(4) 含50% 磷酸盐缓冲液，pH ；200ml，现配。
(5) NaCl的磷酸盐缓冲液，；现配。
(6) mol/L NaCl的磷酸盐缓冲液，；现配。
(7) mol/L NaCl的磷酸盐缓冲液，；现配。
(8) 测活缓冲液：含30mmol/L ，；现配。
(9) 底物溶液Ⅰ：40mg溶壁微球菌干粉溶于100mL测活缓冲液中；现配，公用。
(10) 考马斯亮蓝G-250试剂：考马斯亮蓝G-250 100mg溶于50mL 95%乙醇中，参加100mL 85%磷酸，用蒸馏水稀释至1000mL，滤纸过滤；公用。
(11) 标准蛋白质溶液： ，；公用。
(12) 底物溶液Ⅱ：300mg溶壁微球菌干粉溶于100ml测活缓冲液中；〔生物技术班不用配制〕。
(13) 10mol/L 脲，测活缓冲液配制；〔生物技术班不用配制〕。
(14) 30%胶贮液：每100mL中含丙烯酰***，甲叉双丙烯酰***；
(15) Tris-HCl pH ；购置，不用配。
(16) Tris-HCl pH ；购置，不用配。
(17) 10%〔W/V〕过硫酸铵；现配。
(18) SDS电泳缓冲液：25mmol/L Tris， Gly，%〔W/V〕SDS；
(19) 10%〔W/V〕SDS；公用。
(20) 染色液：-250，42mL工业酒精，10mL冰醋酸，加蒸馏水至50mL；
(21) 脱色液：5mL冰醋酸，45mL工业酒精，50mL蒸馏水；100ml
(22) 保存液：7%冰醋酸；现配。
(23) 2×上样缓冲液