酵母蔗糖酶的分离提取 (修复的).doc

酵母蔗糖酶的分离提取(修复的)
酵母蔗糖酶的分离提取
摘要:介绍了从酵母菌中提取蔗糖酶的过程和方法。利用有机溶剂自溶法、质量分数50%乙醇分级和透析的方法纯化蔗糖酶,测得蔗糖酶的总活力和蛋白质含量均逐渐下降。
关键词:酵母、蔗糖酶、提取、纯化
Abstract:This paper introduces the process and the method of invertase extraction from the purified invertase was obtained by anic dissolvant,precipitatation with 50% ethyl alcohol and dialyzing。The results showed the whole vigour and the content of potein was all decreased by degrees.
Key words: yeast;invertase;extraction;purification
蔗糖酶(invertase)(β-D-呋喃果糖苷水解酶)(fructofuranoside fructohydrolase)(),又称转化酶,特异地催化非还原糖中的β-D-呋喃果糖苷键水解,具有相对专一性。不仅能催化蔗糖水解生成D-葡萄糖和D-果糖,也能催化棉子糖水解,生成密二糖和果糖。由于果糖甜度高,-,在工业上具有较高的经济效益,蔗糖酶的最适温度为45℃~50℃,~.


1) 酵母粉(实验室提供)
2) 醋酸钠()
3) 乙酸乙酯(8ml)
4) 10%醋酸
5) 无水乙醇
6) 蒸馏水
7) 3,5-二***水杨酸试剂(DNS)
8) 考马斯亮蓝G-520
9) 5%蔗糖
10) NaOH溶液
11) 系列标准蛋白液
12) 9%生理盐水
13) 蛋白质染色液
14) 磷酸缓冲液buffer( )
注:整个实验应避免高温,以防止酶失活(水浴温35℃)

1) 量筒25ml
2) 烧杯100ml、500ml
3) 大小试管若干
4)
5)
6)
7)
8)
9)
10)
11)
、玻棒、胶头滴管、PH试纸、各种滴定管恒温水浴锅、冰水浴锅秒表离心管、离心机分光光度计冰箱透析袋托盘天平操作方法
蔗糖酶粗品制备方法
1)自溶法将5g酵母粉倒入500mL烧杯中、少量多次地加入15mL蒸馏水,搅拌均匀,、8mL乙酸乙酯,搅匀,盖好,于35℃恒温水浴中搅拌30min。
2)抽提补加蒸馏水10mL,搅匀,盖好,于35℃恒温过夜,4000r/min 离心10min,弃沉淀,得E1;量体积V1=,取出2mL置于4℃冰箱保存,待测酶活力及蛋白质浓度(留样1)。
3)乙醇分级和透析
测E1 PH:用10%(注意少量、慢加、搅匀,防止调过), 10%HAc;
第一次乙醇分级(30%乙醇饱和度):计算出使E1得乙醇浓度达30%,将E1和乙醇X1,放入冰浴中预冷,在不断搅拌下缓慢滴加乙醇,4000r/min离心10min,弃沉淀,留上清,得E2;量体积V2=(留样2);
第二次乙醇分级(50%乙醇饱和度)同上法加入X2(为达50%乙醇饱和度时需要补加的无水乙醇的体积),计算的加入无水乙醇X2为
。4000r/min离心10min,弃上清,沉淀立即用10ml/150mol/,并装入透析袋,透析6小时,之后,4000r/min离心10min,得E3,量体积V3=(留样3);

取5%的蔗糖、酶液5ml分别于35℃水浴中预热5min[若酶浓度过高,(PH=)适当稀释]。
-200倍,即得稀释后的酶液。
表1 蔗糖酶水解蔗糖试管
5%蔗糖(mL)
1mol/ml NaOH(mL)
酶液(mL)
1mol/ml NaOH(mL) 0 2 2 35℃水浴,3min
1 2 2
表2 还原糖的测定
试管
反应液(mL) DNS试剂(mL) 水(mL) 水(mL) OD520