特殊染色.doc

AAgNOR染色法:1、试剂配制:(1)AgNOR染色液:甲液:明胶2g溶于双蒸水至99ml,在60℃使之完全溶解,再加入纯甲酸1ml摇匀待用。乙液:***银50g溶解于双蒸水中至100ml,4℃冰箱保存。(2)AgNOR工作液取甲液10ml,乙液20ml临用前混合。2、步骤:(1)切片脱蜡至水(2)双蒸水洗2次(3)AgNOR工作液中(25℃)浸染30分钟(暗处进行)(镜下观察)(4)双蒸水洗3次(5)脱水,透明,封固3、结果:油镜观察,细胞核及胞质背景为淡黄色,AgNOR呈棕黑色颗粒状。B鞭毛染色法::甲液:丹宁酸5克***化铁(FeCl3)(15%)(NaOH)1%:***银(AgNO3)2克蒸馏水100毫升制备乙液时,待***银溶解后,取出10毫升备用,向余下的90毫升***银液中滴加浓氢氧化铵,先呈很浓厚的沉淀,再继续滴加至刚刚溶解沉淀成澄清液为止。再将备用的***银溶液慢慢逐滴加入澄清液中,先呈现薄雾,但轻摇则消失,继续边滴加边摇动,待澄清液呈现略有轻微不消散的薄雾状为止。如雾重,则银盐沉淀,不宜使用。:(1)将待检菌接种在新制备的肉汤琼脂斜面上,置37°培养16—20小时,备用。(2)在载玻片的中部相隔一厘米处,用接种环各沾一滴蒸馏水,然后用接种环挑取湿润处的菌苔少许于一端的水滴中,倾斜玻片使培养物流至另一水滴中,两水滴自然相通,菌体从上位自然扩散到下位水滴中,待干燥后染色。(3)在干燥涂片上加甲液3—5分钟,用蒸馏水冲洗。将残水沥干或用乙液冲去残水后,加适量乙液保持30—60秒钟。染色时在酒精灯上稍加热,使染液出现蒸汽即可,用蒸馏水冲洗。(4)镜检:菌体及鞭毛皆染成茶色。:(1)染液最好随用随配,存放至次日效果则差。(2)一定要充分洗净甲液后再加乙液,否则背景较脏。(3)防止水及培养物沾有***化物。(4)切忌用接种环涂抹培养物。(5)载玻片一定要洗净。先用洗衣粉煮沸,再水洗,干后放在洗液中,浸泡24小时,取出水洗除去残酸,沥干,存放于95%乙醇中备用。(6)加热时最好置金属板上,使载玻片受热均匀。β-半乳糖苷酶可以催化二糖乳糖水解为单糖:葡萄糖和半乳糖。β-半乳糖苷酶的活性可以用X-gal(5-溴-4-氢-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)等显色底物加以检测,β-半乳糖苷酶可将X-gal转变为不溶性的深蓝色沉淀。X-gal可以做为组织染色剂,可以在所有表达β-半乳糖苷酶的植物和动物组织上产生颜色。AE染色步骤1、试剂配制:(1)A液:萘酚-AS—D***醋酸10mg溶于N,N-二***甲酰***1ml中。(2)4%副品红液:取盐酸副品红(EM级)1g,溶于蒸馏水20ml内,再加入10m1/L的HCl5m1,稍加温以增加溶解度,过滤、贮室温下。于使用前,取等量副品红液与新鲜的4%亚***钠混合,之后用淀粉碘化物试纸测试,瞬间试纸应变为蓝色才合格,如果不变色,应加入更多的亚***盐。(3)B液:-醋酸缓冲液()30ml,加入新配制的副品红液3滴,用1moI/。2、染色步骤:(1)将A.、B二液混合,过滤,加入***化钠(17mg/10ml),.(2)切片置于上述溶液内孵育1h(30℃)(3)流水冲洗。(4)苏木素复染。(5)空气干燥后封固。GGrimelius***银反应法(嗜银反应):1、试剂配制:***银液:1%***()10毫升还原液:对苯二酚1克亚硫酸钠5克蒸馏水100毫升2、染色步骤:(1)切片脱蜡至蒸馏水(2)60℃***银液内3小时(3)用滤纸吸去周围银液,蒸馏水速洗(4)入45℃的还原液处理1分钟(5)蒸馏水洗(6)5%硫代硫酸钠处理1分钟(可不做)(7)水洗,脱水,透明,封固3、结果:嗜银颗粒呈棕黑色。正常时嗜银颗粒存在于神经内分泌细胞,故此法主要用于神经内分泌肿瘤的诊断。HHID染色法1、染色步骤:(1)切片脱蜡至蒸馏水(2)放入预热的1当量盐酸中10分钟(3)蒸馏水洗(4)Schiff液中染10分钟(5)自来水洗15分钟至细胞核红色(如2~5步不做,可在染好爱先蓝后染核固红2分钟)(6)蒸馏水洗(7)高铁二***液18~24小时(8)爱先蓝液()染10~20分钟(9)蒸馏水洗(10)脱水,透明,封固2、结果:硫酸化酸性粘液呈棕黑色,羧基化酸性粘液(唾酸粘液)物质蓝色。硫酸化酸性粘液可见于大肠粘膜,而小肠粘膜仅出现唾酸粘液,此法多用于确定肠化的分型。HP(***银法)1、试剂配制:(1)醋酸缓冲贮备液,,