3_5_二硝基水杨酸法_DNS_测定壳聚糖酶活力探讨.pdf

食品科技 FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 2012 年第 37 卷第 1 期食品安全与检测· 240 · 由壳聚糖制备壳寡糖的方法之一是采用专一性的壳聚糖酶,而这一生物降解方法已成为研究的热点,在中国清华网站和维普网上可以搜索的有关壳聚糖酶的文章达到200多篇,如果加上其他未被引用的不下几百篇之多。壳聚糖酶作为专一性的酶在壳寡糖制备工业中具有举足轻重的地位。壳聚糖酶酶活的测定显得尤为重要,而酶活的测定却没有具体的标准,这样,所得酶活的高低就无从比较。壳聚糖酶活力的测定最常用的收稿日期: 2010-12-10 基金项目: 武生院校级教研项目(2010J02) ; 湖北省教育厅基金项目(B20084004) ; 武汉市教育局基金项目(2007K057) 。作者简介: 涂绍勇(1979 —) , 男, 湖北鄂州人, 硕士研究生, 讲师, 主要从事酶制剂的生产和应用研究工作。方法是3,5-二硝基水杨酸比色法(DNS法),该法相对于其他方法而言具有操作简便,对试剂、仪器等条件要求不高等优点,但在测定过程中, 所选定的测量波长各不相同,有500 [1] 、520 [2] 、 540 nm [3] 等。测酶活的反应时间也各不相同,有 10 [4] 、15 [5] 、30 [6]、60 min [7] 不同的反应时间,鉴于此,本文就壳聚糖酶活普遍采用的DNS法进行了研究,以期为从事该领域研究人员提供一定的参考。涂绍勇 1 ,杨爱华 2 ,梅双喜 1 ,王海波 1 ,李 佳 1 (1. 武汉生物工程学院生物工程系, 武汉 430415 ; 2. 武汉生物工程学院化学与环境工程系, 武汉 430415) 摘要: 对壳聚糖酶活力的 DNS 测定法进行了探讨。着重考察了最适波长和反应时间, 结果确定适宜的波长为 490 nm , 反应时间为 15 min. , 为相关试验提供参考。关键词: DNS 法; 壳聚糖酶; 最适波长; 反应时间中图分类号: TS + 5 文献标志码: A 文章编号: 1005-9989(2012)01-0240-03 Determination of chitosanase activity by 3,5-dinitrosalicylic acid TU Shao-yong 1, YANG Ai-hua 2, MEI Shuang-xi 1, WANG Hai-bo 1, LI Jia 1 ( of Bioengineering , Wuhan Bioengineering Institute , Wuhan 430415; of Chemistry and Env ironment Engineering, Wuhan Bi oengineering Institute, Wuhan 430415) Abstract: Determination of chitiosanase by DNS was discussed in this paper. The factors included the optimum wavelength and reaction time were investigated