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实验五、3,5-二硝基水杨酸法测定蔗糖酶活力.ppt

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实验五蔗糖酶的活力测定
1
实验目的:
掌握3,5二硝基水杨酸测定还原糖的原理和方法
掌握酶的活力测定及其计算方法
2
实验原理:
蔗糖酶是一种水解酶,它催化蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖。
本实验利用3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物。在一定浓度范围内,还原糖的量与棕色物质颜色深浅程度成一定比例关系,可用分光光度计进行测定。
3
酶活力单位:在35℃,()%蔗糖溶液释放1 mg还原糖的酶量定义为一个活力单位(U)。
4
试剂与器材
蔗糖酶溶液
5%的蔗糖溶液
DNS试剂(3,5二硝基水杨酸试剂)
1mg/ml的葡萄糖标准液
试剂
5
器材
微量移液器
移液管
刻度试管
水浴锅
分光光度计
比色杯
卫生纸
6
操作步骤

管号
试剂
0
1
2
3
4
5
标准葡糖溶液/ml
0

蒸馏水/ml

0
DNS试剂/ml

沸水浴中煮沸5min,取出,冷却至室温
蒸馏水/ml
定容至10ml
葡萄糖含量/mg
0

A540
7
以葡萄糖(mg)含量为横坐标,A540值为纵坐标,绘出工作曲线。
8
制作工作曲线的注意事项

测样时,~,否则,缩小或加大样品的稀释倍数,重测!
9
:
向杯中加样品时,注意加样到比色杯的2/3处;
如样品外溢,用卫生纸向一个方向擦至透明;
测定样品时,从浓度低到高测定;
测定完成后,一定用洗瓶中的蒸馏水洗干净,然后倒置在滤纸上吸干;
任何情况下都不许把比色杯放在仪器盖上!
10

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4蔗糖酶活力测定——3[1].5－二硝基水杨酸法

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