还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法实验 百替生物.pdf

还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法实验_百替生物实验
碳水化合物
实验一 还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法
一、目的
掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学****比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、原理
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或***基的糖类，单糖都是还原
糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶
解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸
水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄
糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的 3-氨
基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，
在 540nm 波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多
糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以 。
COOH COOH
OH
OH 加 热
+ 还原糖 + 糖 酸
碱 性
O2N NO2 O2N NH2
氨基 硝基水杨酸（棕红色）
3,5-二硝基水杨酸（黄色） 3- -5-

三、实验材料、主要仪器和试剂
1． 实验材料
小麦面粉；精密 pH 试纸。
2． 主要仪器
（1）具塞玻璃刻度试管：20mL×11
（2）大离心管：50mL×2
（3）烧杯：100mL×1
（4）三角瓶：100mL×1
（5）容量瓶：100mL×3
（6）刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1
（7）恒温水浴锅
（8）沸水浴
（9）离心机
（10）扭力天平
（11）分光光度计
3． 试剂
（1）1mg/mL 葡萄糖标准液
准确称取 80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖 100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到
100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至 100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
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（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂
将 DNS 和 262mL 2M NaOH 溶液，加到 500mL 含有 185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加 5g
结晶酚和 5g 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至 1000mL，贮于棕色瓶中备用。
（3）碘-碘化钾溶液：称取 5g 碘和 10g 碘化钾，溶于 100mL 蒸馏水中。
（4）酚酞指示剂：称取 酚酞，溶于