实验一3.5一二硝基水杨酸比色定糖法.doc

实验一3.5一二硝基水杨酸比色定糖法.doc实验一 3. 5 一二硝基水杨酸比色定糖法
【目的和要求】
1 •掌握3, 5 一二硝基水杨酸比色法定糖的原理及方法。
2•用3, 5 一二硝基水杨酸定糖法测定山芋粉中的总糖及还原糖。
【原理】
3，5一二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物， 在一定
范围内，还原糖的量和反应液的颜色强度呈现比例关系， 利用比色法可测知样品
的含糖量。
该方法是半微量测糖法，操作简便，快速，杂质干扰较小。
【操作方法】
一、葡萄糖标准曲线的绘制
取9支大试管，分别按下表顺序加入各种试剂:
项目
空白
1
2
3
4
5
6
7
8
含糖总量(mg
0








%葡萄糖标准 液(ml)
0








蒸馏水(ml)









DNS 试剂(ml)









力卩 热
均在沸水浴中加热5 min
冷 却
立即用液动冷水冷却
蒸馏水(ml)









光密度(D520)
将上述各管溶液混匀后，用72型分光光度计(520nm进行比色测定，用空 白管溶液调零点，记录光密度值。以葡萄糖浓度为横坐标，光密度值为纵坐标绘 制出标准曲线。
二、山芋粉中总糖和还原糖含量的测定
1 •样品中还原糖的提取：准确称取 2g山芋粉，放入100ml烧杯内，加入 85%乙醇50ml，混匀，在50E恒温水浴中保温 30min,过滤，滤渣再用85% 乙醇提取二次。将滤液合并，蒸去乙醇，加少量水，移入 100ml容量瓶中，用水 定容，备用。
2•样品中总糖的水解及提取：准确称取出芋 1g,放入大试管中，加入1ml 6mol盐酸和15ml蒸馏水。混匀，在沸水浴中加热半小时后，用碘化钾—碘溶液 检查水解程度，若已水解完全，则不呈现蓝色。冷却后加入酚酞指示剂 1滴。以
10%氢氧化钠中和至溶液呈微红色。过滤并定容至 100ml。再精确吸取上述溶液 10ml，放入100ml容量瓶中，定容，备用。
3•样品中含糖量的测定：取7支大试管，分别按下表加入各种试剂:
项目
空白
1
2
3
4
5
6
样品量(ml)
0






蒸馏水(ml)







DNS 试剂(ml)







力卩 热
均在沸水浴中加热5 min
冷 却
立即用液动冷水冷却
蒸馏水(ml)







光密度(D520)
将各管混匀后，按制作标准曲线时同样的操作测定各管的光密度， 在标准曲 线上查出相