生化教案实验一还原糖和总糖的测定(3,5-二硝基水杨酸比色法).docx

生化教案实验一还原糖和总糖的测定(3,5-二硝基水杨酸比色法)
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实验一 还原糖和总糖的测定 (3,5- 二硝基水杨酸比色法 )
一、实验目的
1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理
2、学****比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用
二、实验原理
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或***基的糖类。单糖都是还原糖，双糖和多糖不
一定是还原糖，例如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用各
种糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来。对非
还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成还原性单糖进行测定，再分别
求出样品中还原糖和总糖的含量 (常以葡萄糖含量计 )。
还原糖在碱性条件下加热可被氧化成糖酸及其它产物，而氧化剂 3,5-二硝
基水杨酸则被还原为桔红色的 3-氨基 -5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的
量与桔红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计在 540nm 波长下测定
吸光度，参照标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多
糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时
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应乘以系数 （ n
180n ）
（ DNS） （ 3—氨基— 5—硝基水杨酸）
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黄色 桔红色
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三、实验材料和仪器
1、实验材料
面粉； 1mg/mL 葡萄糖标准液； 3,5-二硝基水杨酸 (DNS)试剂；碘 -碘化钾溶液；酚酞指示剂； 6mol/L HCl ； 6mol/L NaOH ； 2mol/L NaOH 。
2、实验仪器
试管： 15mm× 180mm×12；
烧杯： 100mL×6，500mL×1,
锥形瓶： 100mL×1；
容量瓶： 100mL×3 ,25mL×1;
吸量管： 10mL× 3， 2mL×3，1mL ×3；
恒温水浴锅 ；900mL 烧杯（或不锈钢杯子）× 1；载玻片；玻璃棒；胶头滴管；分光光度计；漏斗；滤纸；试管架；擦镜纸；电子天平等。
四、实验过程

（ 1）还原糖的提取
用 100mL 烧杯准确称取面粉，先用少量蒸馏水调成糊状，然后加入 15mL 蒸馏水，搅匀，置 50℃恒温水中保温 20min，并不断搅拌，使还原
糖浸出。过滤，将滤液全部收集在 25mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度
线，作为还原糖待测液。
2）总糖的水解和提取
用 100mL 锥形瓶准确称取 面粉，加 15mL 蒸馏水及 10mL 6mol/L
盐酸，置沸水浴中加热水解 30min，吸出一滴滴在载玻片上，用碘 - 碘化钾
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溶液检查水解是否完全，若溶液不变蓝色说明水解完全。待锥形瓶中的水解
液冷却后，加入 1 滴酚酞指示剂，用 6mol/LNaOH 溶液中和，接近滴定终点
时改用 2mol/LNaOH 溶液中和至微红色，用蒸馏水定容在 100mL 容量瓶中。过滤，取滤液 10mL，移入 100mL 容