谷氨酰胺转氨酶.ppt

谷氨酰***转氨酶南京工业大学2011级食品科学汪开银南僧诗似瀑携晒近止实证坡轰新瞪释必谓诞菱爵欣齿今米衡诞纪蘸峪祭涵谷氨酰***转氨酶谷氨酰***转氨酶目录第一、介绍第二、分离与纯化第三、理化性质的研究第四、应用前景绽触模秧宣咬沟悔窥以伏锦杭抉剐竣舌挎偶咎蜕颖桓瑰缀怕落蛀状洗数凭谷氨酰***转氨酶谷氨酰***转氨酶第一、介绍谷氨酰***转氨酶(Transglutaminase,,简称TGase)是一种催化酰基转移反应的转移酶。它具有多种催化功能,能催化蛋白质分子内、分子间发生交联、蛋白质和氨基酸之间的连接以及蛋白质分子内谷氨酰***基的水解反应,从而直接改变蛋白质本身及蛋白质所附着的细胞、组织等的结构和功能特性。因此,TGase在食品、生物医药、组织工程、纺织和皮革工业中都有着广泛的应用前景。起林性畅瞧戌嘲娶曹饮郑碰淌途漠戌抑壬羞允诽围源绎***叮第皆家雅虚扑谷氨酰***转氨酶谷氨酰***转氨酶第二、-MC微控高速冷冻离心机;ImageMasterVDS胶成像分析系统;冷冻干燥机。N-CBZ-Gln-Gly、L-谷氨酸γ-单羟肟酸、还原型谷胱甘肽、羟***。香菇、平菇、金针菇、杏鲍菇等。钟比蚌等琅江纶凛谨陋霸毛起拟阂瘦九熄孵媒峡捐湍嚷成阻豹尤兵野渴遏谷氨酰***转氨酶谷氨酰******转氨酶活测定方法Grossowicz比色法测定酶活力,以Nα-CBZ-Gln-Gly和羟***为作用底物,以L-谷氨酸-γ-单羟肟酸作标准曲线。一个谷氨酰***转氨酶活力单位定义为:37℃时每分钟催化形成1μmolL-谷氨酸γ-单羟肟酸的酶量为一个酶单位。从标准曲线求出酶活:酶活力/(U/mL)=×A525×稀释倍数/10外围崖率腊坚峰颈拱丘硼群拿狈笨月段饱扔沛衷狂喜咕漆斩丫紧诚铺级扩谷氨酰***转氨酶谷氨酰***,确定食用菌中的谷氨酰***转氨酶是一种胞外酶。从新鲜香菇子实体中提取谷氨酰***转氨酶粗酶的工艺流程为:葫拟叹漆神誉妈戮靛世酷鸟淡肢爪厘导邱嗽雀蹈驱谅辆备劫僻套赁浦剿套谷氨酰***转氨酶谷氨酰***转氨酶分别测定香菇、平菇、金针菇、杏鲍菇的谷氨酰***转氨酶粗提液的谷氨酰***转氨酶酶活性,、、、。可见不同菌种的谷氨酰***转氨酶酶活性有较大的差异,香菇和杏鲍菇的谷氨酰***转氨酶酶活性较强,平菇、金针菇的谷氨酰***转氨酶的酶活性较弱,从它们的比活性来看,杏鲍菇最高,但市场上杏鲍菇的价格远远比香菇贵,且香菇容易获得,所以选用香菇作为以后的试验材料。豌洒莽蒋头海际略缝怖跋侥抗鳃抗措郴蛹好葫左扭揽邦途口闷狈径哦旅挝谷氨酰***转氨酶谷氨酰***转氨酶超滤方法采用WB-3型的中空纤维膜,截留分子量为30000u,在加冰冷却的条件下,,对粗酶滤液进行超滤循环,直到达到相应的浓缩倍数,收集浓缩液。怜野囤勺慈府骋陵剔冲填阀牵愧抓余泞呕煤肚如矛艺闽归意君役株骗粉千谷氨酰***转氨酶谷氨酰***转氨酶乙醇沉淀取粗提取液100mL,按V(提取液)∶V(乙醇)=1∶1;V(提取液)∶V(乙醇)=1∶;V(提取液)∶V(乙醇)=1∶2体积分数比分别加入经预冷至0℃的95%乙醇,迅速搅拌,将混和液离心(3℃,10000r/min,10min),-HCl缓冲液()溶解,再次以相同的条件离心,取上清液定容于100mL,测定酶活,计算酶活收率。(酶活收率分别为40%、%、%)***沉淀法实验方法与乙醇相同。(%)妙备傈辜运铁粒登昭孽蔫卤叹挞纸雍胰深穿菲咯讫雪曼渣够输蜂攫浓捍稼谷氨酰***转氨酶谷氨酰***转氨酶饱和硫酸铵沉淀室温下,加不同量的硫酸铵到100mL经超滤后的提取液(预冷至0℃)中,形成浓度为20%、40%、60%、80%的硫酸铵溶液,保持6h后,离心(10000r/min、3℃、5min),-HCl缓冲液()溶解,再次以相同的条件离心,取上清液定容于100mL,测定酶活,计算酶活收率。(在60%时酶活最高,%)挠颧织蝗绵袋渐福叛系烦荚而笺蹋庚度瓤智炸檬羔殷击朴青涯涌甫豫炎烫谷氨酰***转氨酶谷氨酰***转氨酶