氨基酸薄层层析-实验报告.docx

南方国科丈号
生物化学实验报告
姓 名：
学 号：
专业年级：
组 别：
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称
氨基酸的薄层层析
实验日期
实验地点
指导老师
合作者
评分
教师签名
批改日期
一、实验目的
掌握薄层层析法的一般原理。
掌握氨基酸薄层层析法的基本操作技术。
掌握如何根据移动速率（ Rf 值）来鉴定被分离的物质（即氨基酸混合液） 。
二、实验原理
薄层层析法是色谱分析技术的一种
一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。当液相（展开溶剂）在固
定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的
溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以
彼此分开。 （即通过吸附 -解吸 -再吸附 -再解吸的反复进行，而将样品各组分分离开来）
氨基酸与茚三***的显色反应
茚三***水化后生成水化茚三***，它与氨基酸的羧基反应生成还原茚三***、氨及醛，
与此同时，还原茚三***又与氨及茚三***缩合生成紫红化合物而使氨基酸斑点显色。
混合氨基酸被分离后在薄层层析图谱上的位置用相对迁移率— Rf 值来表示。
层析中，物质沿溶剂运动方向迁移的距离与溶液前沿的距离之比为 Rf 值。由于物
质在一定溶剂中的分配系数是一定的，故移动速率（ Rf 值）也是恒定的，因此可以根据
Rf值来鉴定被分离的物质。（Rf=斑点至原点距离/溶剂前缘至原点距离）
三、材料与方法：
实验材料：
实验试剂：①分析样品：氨基酸混合液；②吸附剂： 硅胶；③粘合剂：% 的竣***纤维素钠；④氨基酸的异丙醇溶液；⑤丙氨酸、精氨酸、甘氨酸；⑥展开 -显 色剂（正丁醇、乙酸、水、苗三***溶液）
实验器材：①层析板、尺子、铅笔；②烧杯、玻棒、量筒；③吹风机；④毛 细管、层析缸；⑤药匙；⑥烘箱
实验步骤：
制板 , 点样 —层析—显色—处理与结果分析
制板：①调浆：称取硅胶3克，%的竣***2T维素钠8毫升，调成均匀 的糊状；②涂布：取洁净的干燥玻璃板均匀涂层；③干燥：将玻璃板水平放置，室温下 自然凉干；④活化：70c烘干30分钟。切断电源，待玻璃板面温度下降至不烫手时取 出。
点样：①位置：用铅笔距底边2cm水平线上均匀确定4个点。每个样品间相 距约1cm；②取样：用毛细管分别吸取氨基酸溶液，取样量为毛细管柱高 5cm；③点样： 点样毛细管轻轻接触薄层表面点样。加样后原点扩散直径不超过 2mm
层析和显色：将薄层板点样端浸入展层-显色剂，展层-显色剂液面应低于点 样线。盖好层析缸盖，上行展层。当展层剂前沿离薄板顶端 2cm时，停止展层，取出薄 板，用铅笔描出溶剂前沿界线，用热风吹干或在 85c下烘干，即可显出各层斑点。
处理和结果分析：小心量出斑点中心至原点中心距离，再量出原点中心至溶 剂前沿的距离，计算出它们的 Rf值。根据Rf值，鉴定出混合样品中氨基酸的种类，并 绘出层析图谱。
注意事项：①切勿用手直接接触薄层板面；②点样过程中必须在第一滴样品干 后再点第二滴；③样品量太少，有的成分不易显示；样品量太多，易造成 斑点过大，
互相交叉或拖尾。
四、结果与讨论：
实