氨基酸薄层层析实验报告.docx

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氨基酸薄层层析实验报告
生物化学实验报告
姓名：
学号：
专业年级：
组别：
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称
氨基酸的薄层层析
实验日期
实验地点
合作者
指导老师
评分
教师签名
批改日期
实验目的
.掌握薄层层析法的一般原理。
.掌握氨基酸薄层层析法的基本操作技术。
.掌握如何根据移动速率（Rf值）来鉴定被分离的物质（即氨基酸混合液）。
二、实验原理
.薄层层析法是色谱分析技术的一种
一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。当液相（展开溶剂）在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此分开。（即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行，而将样品各组分分离开来）。
.氨基酸与茚三***的显色反应
茚三***水化后生成水化茚三***，它与氨基酸的羧基反应生成还原茚三***、氨及醛，与此同时，还原茚三***又与氨及茚三***缩合生成紫红化合物而使氨基酸斑点显色。
.混合氨基酸被分离后在薄层层析图谱上的位置用相对迁移率—Rf值来表示。
层析中，物质沿溶剂运动方向迁移的距离与溶液前沿的距离之比为Rf值。由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的，故移动速率（Rf值）也是恒定的，因此可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。（Rf=斑点至原点距离/溶剂前缘至原点距离）
三、材料与方法：
.实验材料：
①分析样品：氨基酸混合液；②吸附剂：硅胶；③粘合剂：%的羧***纤维素钠；④氨基酸的异丙醇溶液；⑤丙氨酸、精氨酸、甘氨酸；⑥展开-显色剂（正丁醇、乙酸、水、茚三***溶液）
①层析板、尺子、铅笔；②烧杯、玻棒、量筒；③吹风机；④毛细管、层析缸；⑤药匙；⑥烘箱
.实验步骤：
层析
显色
处理与结果分析
点样
制板
①调浆：称取硅胶3克，加%的羧***纤维素钠8毫升，调成均匀的糊状；②涂布：取洁净的干燥玻璃板均匀涂层；③干燥：将玻璃板水平放置，室温下自然凉干；④活化：70℃烘干30分钟。切断电源，待玻璃板面温度下降至不烫手时取出。
①位置：用铅笔距底边2cm水平线上均匀确定4个点。每个样品间相距约1cm；②取样：用毛细管分别吸取氨基酸溶液，取样量为毛细管柱高5cm；③点样：点样毛细管轻轻接触薄层表面点样。加样后原点扩散直径不超过2mm。
℃下烘干，即可显出各层斑点。
.注意事项：①切勿用手直接接触薄层板面；②点样过程中必须在第一滴样品干后再点第二滴；③样品量太少，有的成分不易显示；样品量太多，易造成斑点过大，互相交叉或拖尾。
四、结果与讨论：
.实验结果
样品斑点-原点溶剂前缘-原点Rf值
混合液混合液混合液图一失败品（左）和层析板（右）图二实验后结果
①第一次制板过程中，将糊状物均匀倒到洁净玻璃板中央部分，用药匙均匀涂满玻璃板，用手左右上下将其摇晃后，糊状物在大部分地方均匀形成涂层，但在其中一侧形成水纹样，无论如何摇晃无法去除；而在第二次制板过程中，重复以上步骤后，糊状物均匀的在玻璃板上形成涂层。（如图一）
②点样后，溶液