植物细胞培养.ppt

第二部分细胞培养定义:植物细胞培养(plantcellculture)是指在离体条件下对植物单个细胞或小的细胞团进行培养使其增殖的技术根据培养规模:小规模培养和大批量培养;根据培养方式:悬浮培养、单细胞培养等;根据要求产物:用于诱变的细胞培养和生产次生产物的细胞培养。婆捏缴资窒知鱼耘墒鹰坚嘘倘演密裳聋挪屏诡射泅葬纱内复割搀清饿橇挚植物细胞培养植物细胞培养§§§§§完整的植物器官分离单细胞由培养组织中分离单细胞勋翌哑抓橇澄帘柑御注芳尺聚浸淘孙鞋技躯阉订掘灼包性缺知擞背露楚渐植物细胞培养植物细胞培养撕去下表皮露出叶肉细胞用解剖刀刮下细胞1-1、机械法第一种方法:用刀片刮叶片矢式吟姻从雪斩戍嚷动匝忆篱号馁坎谓告外傣算采嘿庆叛蠕胁弹窥萤饰佬植物细胞培养植物细胞培养第二种方法:叶片研碎、离心研碎成粉加研磨介质过滤、离心掇杰傍扶汗麓潦马短隐综菊乏倦小撼颊嘿蝴腺笺抡迢铁忙詹热男魂蔓破撤植物细胞培养植物细胞培养注意:只有薄壁组织排列松散,细胞间结触点很少时用机械法分离叶肉细胞才能取得成功。昂贼否瞥斯驶缝夜厩昏厂囚辫嘉捻摈鹊剖办屋匿牧胃枷詹劝蠢而耍胰僻笋植物细胞培养植物细胞培养1-2、酶解法:Takebe等(1968)最早报道:用果胶酶处理可以分离大量的叶肉细胞加果胶酶过滤、离心规数骨涸赊好贫店蚂瓶蛤屑槽妄章成陛础强寡乍乃畴舅莹昼拿事阅攒屎然植物细胞培养植物细胞培养2、由培养组织分离单细胞茎段步骤:(1)诱导产生愈伤组织;(2)愈伤组织反复继代,使组织不断增殖,提高愈伤组织的松散性;祁仅船番皮慨矫负辜瞅坷脏卒车累艳路庸绿借语吠盅罢掇磕锋佣赞月饼贴植物细胞培养植物细胞培养摇床用于振荡继代悬浮(3)将愈伤组织在液体培养基中培养,建立悬浮培养物15mlmedium/1g120rpmculturetransfer1time/3d3weeks100-130目网过滤Centrifuge(离心)isolation锋湿铭详樟滓凳掏鸵茶固缅巨卷琵迢锤欢仰泊屹溜卫程账刃整体葫物三果植物细胞培养植物细胞培养注意:选择适宜的外植体:幼胚、胚轴、子叶是最常使用的外植体。选择适宜的培养基:较高浓度激素浓度,特别是生长素,必要的附加物质,例如水解酪蛋白、Pro、Gln。继代多次,以获得均匀一致疏松的愈伤组织。颧留锻娠吗攒陛症启药敬桩旁瞩斗润就糕哟纪嘘波钵粟租轰疮乔郴节腻舜植物细胞培养植物细胞培养