微生物实验指导书-.doc

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微生物学
实 验 指 导 书
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目录
实验一玻璃器皿清洗、包扎与常用灭菌技术3
实验二 培养基的配制8
实验三从土壤中别离微生物及纯化11
实验四微生物的接种技术14
试验五细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的形态观察17
实验六 细菌的简单染色和革兰氏染色20
实验七 大肠杆菌生长曲线的测定23
实验八 实验室环境和人体外表微生物的检查25
实验九 乳酸菌的检测28
实验一 玻璃器皿清洗、包扎与常用灭菌技术
【目的要求】
1. 学****并掌握棉塞制作的目的、原理及方法；
2. 学****并掌握玻璃器皿清洗及包扎方法；
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【根本原理】
棉塞的作用有二：一是防止杂菌污染，二是保证通气良好。因此，棉塞质量的优劣对实验的结果有较大的影响。
微生物学实验所用的器皿，大多数要进展清洗、消毒、灭菌，才能用来培养微生物。玻璃器皿的包扎方确合理，在使用过程中才能有效防止杂菌的污染。玻璃器皿包扎好后，一般用高压蒸气灭菌法进展灭菌。
高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌锅的压力，从而使沸点增高，得到100℃以上的高温，导致菌体蛋白质凝固变性而到达灭菌的目的。此外，常见灭菌方法还有干热灭菌、灼烧灭菌、紫外线灭菌、过滤除菌等。对空间灭菌常使用甲醛加高锰酸钾熏蒸、喷洒消毒灭菌药剂等消毒灭菌方法。
【实验用品】
棉花，试管，培养皿，纱布，三角瓶，棉线，量筒，牛皮纸〔或旧报纸〕，LDZX-50KBS立式高压蒸气灭菌锅，常用灭菌用具、药剂等等。
【方法步骤】
一、棉塞的制作
正确的棉塞要求形状，大小，松紧与试管口〔或三角瓶口〕完全适合，过紧阻碍空气流通，操作不便；过松那么达不到滤菌的目的。制作过程见图1，包括取棉花、整理、折角、卷紧、成形、塞试管等步骤。塞上棉塞时，应使棉塞长度的1/3在试管口外，2/3在试管口。
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图1 棉塞制作过程
做棉塞的棉花要选纤维较长的，一般不用脱脂棉做棉塞，因为它容易吸水变湿，造成污染，而且价格昂贵。此外，在微生物实验和科研中，往