微生物实验指导书-.doc

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微生物学
实 验 指 导 书
目录
实验一玻璃器皿清洗、包扎与常用灭菌技术3
实验二 培养基的配制8
实验三从土壤中别离微生物及纯化11
实下滑〕，接着按图4方法包扎，后将移液管集中在一起，用一大报纸包好，进展干热或湿热灭菌。
图4 移液管的包扎方法与步骤
3. 试管和三角瓶的包扎
试管管口和三角瓶瓶口塞上棉花塞或硅胶塞后，再用双层报纸包扎好〔如有牛皮纸，效果更好〕，进展干热或湿热灭菌。试管较多时，一般7个或10个一组，再用双层报纸包扎。
四、灭菌及净化设备操作技术
〔一〕高压灭菌锅的使用
利用高压水蒸汽高强度穿透细胞杀灭一切微生物及细胞。
图5 LDZ*-50KBS灭菌锅
图6 LDZ*-50KBS灭菌锅及控制面板
主要灭菌原理是高温度水蒸气〔一般为121℃〕作用于细胞一定时间〔一般为20-30分钟〕使细胞蛋白质凝固变性，而造成一切微生物变性死亡，是最为彻底的灭菌方法之一。主要操作技术见教材及实验操作步骤局部。
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〔二〕超净工作台的使用
1〕 依次翻开电源开关及工作开关，紫外灯照射20 min，开启鼓风机运转10 min，方可进展实验操作。
2〕 将紫外灯切换到照明灯〔鼓风机保持运转〕，翻开玻璃门〔玻璃门开启幅度不能过高，以不超过下巴为宜〕，手臂进入操作台前先点燃酒精灯，再用75%的酒精棉球擦净工作面，并对
手进展消毒。
3〕 操作时，应在工作台中央无菌区域进展〔尽量不要讲话〕。
图7 摆斜面
4〕 操作完毕后熄灭酒精灯，清理工作台。离开前，关闭工作台工作开关及电源开关，将所有物品归位，并带走废弃物。
〔三〕其他常用灭菌工具
图9 电热枯燥箱外观和构造
图8微孔滤膜过滤器装置构
五、实验具体操作步骤
：将试管、三角瓶、培养皿等玻璃器具清洗干净；
2. 烘干：将经清洗干净的试管、三角瓶、培养皿等玻璃器皿放入烘箱中，并相互之间保持适当间距，以保证烘干效果；翻开烘箱电源，设置适当温度〔可根据具体情况而定〕与时间，进展烘干处理；
3. 制作棉塞：按照选取棉花、棉花整理、折角、卷紧、成形、试塞、调整大小等步骤，制作适宜棉塞，应使棉塞长度的1/3在试管口外，2/3在试管〔或三角瓶〕口。另用量筒或吸管取适量自来水于三角瓶和试管中，包扎好以制备无菌水。
4. 包扎：用牛皮纸或旧报纸，一次包扎7～10套培养皿，按照裁剪牛皮纸、放置培养皿等玻璃器皿、卷紧、折边、包扎等步骤，包扎好后空培养皿、移液管等，做到美观大方、放置不到、包扎严密，严防玻璃器皿等露出。
5. 灭菌处理：1〕 翻开电源与开关，检查水位显示灯，视水位显示灯状况，不加或添加适量水〔高水位：不必加水；低水位：视情况而定；缺水：必加水；无显示：视情况而定〕。
2〕 加灭菌物品〔注意：物品不能过于密集，否则会影响灭菌效果〕。
3〕 将锅盖旋到灭菌锅正上方密封处〔注意：锅盖用手提着缓慢旋至正上方，不要触及密封圈，造成密封圈破损，也不要将锅盖旋得太高，否则锅盖无法归位至正上方
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〕。
4〕 按待灭菌物品的要求，设定温度和时间。
5〕 进入工作状态后，查看排气〔水〕阀，将阀门旋至排气处。
6〕 待有大量白色蒸汽产生时，关闭排气阀，关闭后温度持续上升〔注意：在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅冷空气的排除是否完全极为重要〕。
7〕 灭菌完毕，压力降至“0”时，翻开排气阀，气体排尽后，方可开盖，利用锅温度烤干棉塞和纱布后再取物。〔注意：压力一定要降到"0"时，才能翻开排气阀，开盖取物，否则就会因锅压力突然下降，使容器的培养基由于外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至灼伤操作者〕。
3、其他常见灭菌方式
【实验结果】
记录自己制作的实验用品〔含无菌水〕的名称、规格与数量。
【考前须知】
1. 实验前，熟悉实验室布局，了解实验仪器用品摆放规律及用途；
2. 制备无菌水时，试管装水量一般控制在试管高度的1/5~3/5，三角瓶装水量不宜超过规格容量的1/2〔装量过多，灭菌过程中易喷出或润湿棉塞〕；
3. 灭菌锅的操作平安。
【实验思考题】
1. 高压蒸气灭菌开场之前，为什么要将锅冷空气排尽？
2. 灭菌完毕后，为什么待压力降低至“0”时，才能翻开排气阀，开盖取物？
3. 在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，怎样杜绝一切不平安的因素？
4. 灭菌在微生物实验操作中有何重要意义？
实验二培养基的配制
【目的要求】
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