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微生物学
实验指导书
1:.
目录
实验一玻璃器皿清洗、包扎与常用灭菌技术...................................................................3
实验二培养基的配制...........................................................................................................8
实验三从土壤中分离微生物及纯化.................................................................................11
实验四微生物的接种技术.................................................................................................14
试验五细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的形态观察.........................................................17
实验六细菌的简单染色和革兰氏染色.............................................................................20
实验七大肠杆菌生长曲线的测定.....................................................................................23
实验八实验室环境和人体表面微生物的检查.................................................................25
实验九乳酸菌的检测.........................................................................................................28
2:.
实验一玻璃器皿清洗、包扎与常用灭菌技术
【目的要求】
、原理及方法;
;
。

【基本原理】
棉塞的作用有二:一是防止杂菌污染,二是保证通气良好。因此,棉塞质量的优劣对实
验的结果有较大的影响。
微生物学实验所用的器皿,大多数要进行清洗、消毒、灭菌,才能用来培养微生物。玻
璃器皿的包扎方法正确合理,在使用过程中才能有效防止杂菌的污染。玻璃器皿包扎好后,
一般用高压蒸气灭菌法进行灭菌。
高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内,通过加热,使灭菌锅隔
套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽,然后关闭排气
阀,继续加热,此时由于蒸气不能溢出,而增加了灭菌锅内的压力,从而使沸点增高,得到
100℃以上的高温,导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。此外,常见灭菌方法还有
干热灭菌、灼烧灭菌、紫外线灭菌、过滤除菌等。对空间灭菌常使用甲醛加高锰酸钾熏蒸、
喷洒消毒灭菌药剂等消毒灭菌方法。
【实验用品】
棉花,试管,培养皿,纱布,三角瓶,棉线,量筒,牛皮纸(或旧报纸),LDZX-50KBS
立式高压蒸气灭菌锅,常用灭菌用具、药剂等等。
【方法步骤】
一、棉塞的制作
正确的棉塞要求形状,大小,松紧与试管口(或三角瓶口)完全适合,过紧妨碍空气流
通,操作不便;过松则达不到滤菌的目的。制作过程见图1,包括取棉花、整理、折角、卷
紧、成形、塞试管等步骤。塞上棉塞时,应使棉塞长度的1/3在试管口外,2/3在试管口内。
3:.
图1棉塞制作过程
做棉塞的棉花要选纤维较长的,一般不用脱脂棉做棉塞,因为它容易吸水变湿,造成污染,
而且价格昂贵。此外,在微生物实验和科研中,往往要用到通气塞,即用几层纱布(一般8
层)相互重叠而成,或是在两层纱布间均匀铺一层棉花而成。这种通气塞通常加在装有液体
培养基的三角烧瓶口上。经接种后,放在摇床上进行振荡培养,以获得良好的通气促使菌体
的生长或发酵,通气塞的形状如图2。
;;
图2通气塞
二、玻璃器皿的清洗
,也不能使用比玻璃硬度大的物品来擦拭玻璃器皿;新
的玻璃器皿应用2%的盐酸溶液浸泡数小时,用水充分洗干净。
。
、强碱、琼脂等能腐蚀、阻塞管道的物质不能直接倒在洗涤槽内,必须倒在废
液缸内。
,或用水蒸煮,至培养基融化后倒出,然
后再用洗洁精清洗。凡遇有传染性材料的器皿,应经高压蒸汽灭菌后再进行清洗。
、肥皂或洗洁精清洗,油脂很重的器皿应先将油脂擦去。
沾有煤膏、焦油及树脂一类物质,可用浓硫酸或40%氢氧化钠或用洗液浸泡;沾有蜡或有
油漆物,可加热使之熔融后揩去,或用有机溶剂(苯、二甲苯、汽油、***等)揩去。
,先擦去油垢再清洗干净,然
后在稀的洗液里浸泡2小时,用清水冲净,最后用蒸
馏水冲洗,干后浸于95%酒精中保存备用。

而无条纹和水珠。
三、玻璃器皿的包装

培养皿常用旧报纸紧紧包裹,一包7~10套,包好后
干热或湿热灭菌。如果将培养皿放入金属筒内进行干

热或湿热灭菌,则不必用纸包,金属筒有一圆筒形的
带盖外筒,里面放一装培养皿的带底框架(图3),此图3培养皿金属灭菌筒
4:.
框架可自圆筒内提出,以便装取培养皿。

准备好干燥的移液管,,,以免使用
时将杂菌吹入其中,或不慎将微生物吸出管外。棉花要松紧适当(过紧,吹吸液体太费力;
过松,吹气时棉花会下滑),接着按图4方法包扎,后将移液管集中在一起,用一张大报纸
包好,进行干热或湿热灭菌。
图4移液管的包扎方法与步骤

试管管口和三角瓶瓶口塞上棉花塞或硅胶塞后,再用双层报纸包扎好(如有牛皮纸,效
果更好),进行干热或湿热灭菌。试管较多时,一般7个或10个一组,再用双层报纸包扎。
四、灭菌及净化设备操作技术
(一)高压灭菌锅的使用
利用高压水蒸汽高强度穿透细胞杀灭一切微生物及细胞。
图5LDZX-50KBS灭菌锅图6LDZX-50KBS灭菌锅及控制面板
主要灭菌原理是高温度水蒸气(一般为121℃)作用于细胞一定时间(一般为20-30分
钟)使细胞蛋白质凝固变性,而造成一切微生物变性死亡,是最为彻底的灭菌方法之一。主
要操作技术见教材及实验操作步骤部分。
(二)超净工作台的使用
1)依次打开电源开关及工作开关,紫外灯照射20min,开启鼓风机运转10min,方
可进行实验操作。
2)将紫外灯切换到照明灯(鼓风机保持运转),打开玻璃门(玻璃门开启幅度不能过
高,以不超过下巴为宜),手臂进入操作台前先点燃酒精灯,再用75%的酒精棉球擦净工作
5:.
面,并对
手进行消毒。
3)操作时,应在工作台中央无菌区域进行(尽量
不要讲话)。
4)操作完毕后熄灭酒精灯,清理工作台。离开前,
图7摆斜面
关闭工作台工作开关及电源开关,将所有物品归位,并带
走废弃物。
(三)其他常用灭菌工具
图8微孔滤膜过滤器装置构图9电热干燥箱外观和结构
五、实验具体操作步骤
:将试管、三角瓶、培养皿等玻璃器具清洗干净;
:将经清洗干净的试管、三角瓶、培养皿等玻璃器皿放入烘箱中,并相互之间保持
适当间距,以保证烘干效果;打开烘箱电源,设置适当温度(可根据具体情况而定)与时间,
进行烘干处理;
:按照选取棉花、棉花整理、折角、卷紧、成形、试塞、调整大小等步骤,制
作合适棉塞,应使棉塞长度的1/3在试管口外,2/3在试管(或三角瓶)口内。另用量筒或
吸管取适量自来水于三角瓶和试管中,包扎好以制备无菌水。
:用牛皮纸或旧报纸,一次包扎7~10套培养皿,按照裁剪牛皮纸、放置培养皿等
玻璃器皿、卷紧、折边、包扎等步骤,包扎好后空培养皿、移液管等,做到美观大方、放置
不到、包扎紧密,严防玻璃器皿等露出。
:1)打开电源与开关,检查水位显示灯,视水位显示灯状况,不加或添加适
量水(高水位:不必加水;低水位:视情况而定;缺水:必加水;无显示:视情况而定)。
2)加灭菌物品(注意:物品不能过于密集,否则会影响灭菌效果)。
3)将锅盖旋到灭菌锅正上方密封处(注意:锅盖用手提着缓慢旋至正上方,不要触
及密封圈,造成密封圈破损,也不要将锅盖旋得太高,否则锅盖无法归位至正上方)。
4)按待灭菌物品的要求,设定温度和时间。
5)进入工作状态后,查看排气(水)阀,将阀门旋至排气处。
6)待有大量白色蒸汽产生时,关闭排气阀,关闭后温度持续上升(注意:在使用高压
6:.
蒸气灭菌锅灭菌时,灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要)。
7)灭菌结束,压力降至“0”时,打开排气阀,气体排尽后,方可开盖,利用锅内温度
烤干棉塞和纱布后再取物。(注意:压力一定要降到"0"时,才能打开排气阀,开盖取物,否
则就会因锅内压力突然下降,使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管
口,造成棉塞沾染培养基而发生污染,甚至灼伤操作者)。
3、其他常见灭菌方式
【实验结果】
记录自己制作的实验用品(含无菌水)的名称、规格与数量。
【注意事项】
,熟悉实验室布局,了解实验仪器用品摆放规律及用途;
,试管装水量一般控制在试管高度的1/5~3/5,三角瓶装水量不宜超过规格
容量的1/2(装量过多,灭菌过程中易喷出或润湿棉塞);
。
【实验思考题】
,为什么要将锅内冷空气排尽?
,为什么待压力降低至“0”时,才能打开排气阀,开盖取物?
,怎样杜绝一切不安全的因素?
?
7:.
实验二培养基的配制
【目的要求】
;
,掌握配制培养基的一般方法和步骤。
【基本原理】
培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质,用以培养、分离、
鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、能源、无机盐、
生长因素和水。本实验通过配制适用于一般细菌、放线菌和真菌的三种培养基来了解和掌握
配制培养基的基本原理和方法。
培养细菌一般用牛肉膏蛋白胨培养基,它是一种应用十分广泛的天然培养基,其中的牛
肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素,蛋白胨主要提供氮源和维生素,而NaCl
则提供无机盐。高氏Ⅰ号培养基是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基,此合成培
养基含有多种化学成分已知的无机盐,这些无机盐可能相互作用而产生沉淀,因此,在混合
各成分时,一般按配方要求的顺序依次溶解各成分;此外,合成培养基有的还要补充微量元
素,如高氏Ⅰ号培养基中的FeSO·%,在制备培养基时需预先配成
42
高浓度的微量元素贮备液,然后再按一定的量加到培养基中。查氏培养基是用来分离和培养
霉菌的合成培养基;麦氏培养基是用来分离和培养酵母菌的半合成培养基。
培养基各成分添加完成后,用稀酸或稀碱将其pH值调至所需酸碱度,在配制固体培养
基时,还要加入一定量的琼脂作为凝固剂。培养基配制完成后,应立即进行灭菌。
【实验用品】
、试剂牛肉膏,蛋白胨,NaCl,可溶性淀粉,KNO,KHPO·3HO,MgSO·7HO,
324242
FeSO·7HO,蔗糖,NaNO,KCl,葡萄糖,KCl,酵母膏,醋酸钠,lmol/LNaOH,lmol/L
423
HCl,琼脂
,三角瓶,烧杯,量筒,玻璃棒,天平,牛角匙,pH试纸,棉花,
牛皮纸,记号笔,线绳,纱布,漏斗,漏斗架,胶管等
【方法步骤】
一、牛肉膏蛋白胨培养基的配制
(一)配方:牛肉膏5g,蛋白胨10g,NaC15g,琼脂15~20g,水1000mL,~;
(二)步骤:
,称取各种药品放入烧杯中。牛肉膏常用玻璃棒挑取,放
入小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯;也可放在称量纸上称量,随后放入
热水中,待牛肉膏与称量纸分离,立即取出纸片。蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速。
,置放在电热套上,小火加热,并用玻棒搅拌,
待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配制固体培养基,则将称好的琼脂放入己溶
8:.
解的药品中,加热融化,最后补足所失的水分。
,若pH偏酸,可滴加lmol/LNaOH,边加边搅拌,并随时用
pH试纸检测,直至达到所需pH范围。若偏碱,则用lmol/LHCl进行调节。pH的调节
通常放在加琼脂之前。应注意pH值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子的浓
度。
,固体培养基可用4层
纱布趁热过滤,以利培养的观察。但是供一般使用的培养
基,这步可省略。
,可将配制的培养基分装入试管或三
角瓶内。分装时可用漏斗或分装器以免使培养基沾在管口
或瓶口上而造成污染。
分装量:固体培养基约为试管高度的l/5,灭菌后制成
斜面。分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。半固
体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。
(非
脱脂棉)制作的棉塞。棉塞的形状,大小和松紧度要合适,
四周紧贴管壁,不留缝隙,才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用。有些微生物需要
图10简易分装器更好的通气,则可用通气塞。有时也可用硅胶塞、试管帽
或塑料塞代替棉塞。
,将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸,以防灭菌时冷凝水沾湿棉
塞。若培养基分装于试管中,则应以5~7支在一起,再于棉塞外包一层牛皮纸,用绳扎
好。然后用记号笔注明,培养基名称,组别,日期。
℃,湿热灭菌20min。如因特殊情况不能及时灭菌,应放入冰
箱内暂存。
,倒平板或制斜面。如制斜面应趁灭菌后未冷却前摆放成斜面,
倒平板可放置到需要时,再加热溶化制作。
℃恒温培养箱
中培养24~48h,无菌生长即可使用,或贮存于冰箱
或清洁的橱内,备用。
二、高氏Ⅰ号培养基的配制
(一)配方:可溶性淀粉20g,KNO31g,,
K2HPO4·,MgSO4·,FeSO4·7H2O
,琼脂15~20g,水1000mL,~。
(二)步骤:
,按用量先称取可溶性
淀粉,放入小烧杯中,并用少量冷水将其调成糊状,
图11倒平板方法
再加至少于所需水量的水,继续加热,边加热边搅拌,
至其完全溶解。再加入其他成分依次溶解。对微量成分FeSO·7HO可先配成高浓度的
42
贮备液后再加入,方法是先在1000mL水中加入1g的FeSO·7HO,
42
9:.
的贮备液,再在1000mL培养基中加入以上贮备液1mL即可。待所有药品完全溶解后,
补充水分到所需的总体积。如要配制固体培养基,其琼脂溶解过程同牛肉膏蛋白胨培养
基配制。
,分装,包扎,灭菌及无菌检查同牛肉膏蛋白胨培养基配制。
三、PDA培养基的配制
(一)配方:马铃薯(去皮)200克,葡萄糖20克,琼脂15~20g,水1000mL,pH自然
(二)步骤:称取洗净去皮马铃薯200g,切成小块,加水煮烂(煮沸20~30分钟,能被玻
璃棒戳破即可),用八层纱布过滤,取滤液,加热,再据实际实验需要加入琼脂,继续加
热搅拌混匀,待琼脂溶解完后,加入葡萄糖,搅拌均匀,稍冷却后再补足水分至1000
毫升,分装试管或者锥形瓶,加塞、包扎,121℃灭菌20-30分钟左右后取出,试管摆斜
面或者摇匀,冷却后贮存备用。
【实验结果】
记录本实验配制培养基的名称,数量,并说明无菌检查结果,培养基状况及可否使用等。
【注意事项】
,称完药品应及时盖紧瓶盖。
,需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出。
。
【实验思考题】
,为什么必须立即灭菌,若不能及时灭菌应如何处理。
。
。
10:.
实验三从土壤中分离微生物及纯化
【目的要求】
、纯化技术的概念。
、划线等稀释分离微生物技术。
【基本原理】
分离就是把成群的菌体一个一个地分开;纯化就是进一步分离,把菌种绝底分成单个
菌体的技术。要想从含有多种多样、多姿多态微生物的自然界中获得我们所需的菌(菌株),
就要通过各种手段方法把一个一个微生物分离开,然后从中挑选出我们所需要的菌株应用于
研究或生产之中。分离技术有许多种,下面着重介绍从土壤中通过划线法分离细菌、放线菌、
霉菌的技术。
【实验用品】
、高氏1号平板(含1%酚液5~6滴/L)、PDA平板(含
80%红酸1mL/L),土壤样品,无菌水等。
,酒精灯,超净工作台等。
【方法步骤】
取土壤少许,加入一定量的无菌水,制成系列土壤菌悬液。1、涂布法:1)取土样取
图12土壤梯度稀释操作过程图13平板涂布操作图
表层以下5~10cm处的土壤,放入取样袋中,置于4℃冰箱中暂存。
2)土样处理取土样10g,迅速倒入带玻璃珠的90mL无菌水瓶中(玻璃珠用量以
充满瓶底为宜),振荡15~25min,使土样充分打散。
3)梯度稀释用1mL的无菌移液管,从中吸取1mL的土壤悬液加入盛有9mL无菌
水的试管中,充分混匀,然后用无菌移液管从此试管中吸取1mL加入另一盛有9mL无菌
水的试管中,混合均匀,以此类推制成10-1、10-2.、10-3、10-4、10-5等不同梯度的土壤溶液
(操作时移液管尖不能接触液面,每一个稀释度换用一支移液管,每次吸入土液后,要将
11:.
移液管插入液面,吹吸3次,每次吸上的液面要高于前一次,以减少稀释中的误差)。
4)涂布取平板,皿底分别用记号笔写上稀释度,然后用无菌移液管分别从10--5.
10-(从低浓度到高浓度
依次取,不用更换移液管),用无菌玻璃涂布棒按图13,在培养基表面轻轻涂布均匀,室温
下静置5~10min,使菌液吸附进培养基。
2、划线分离法(在接种室或超净工作台内进行)
(1)直线划线法:左手拿平板平皿,盖稍微打开,右手拿接种环,以无菌操作蘸一
图14平板划线法操作图图15平板划线法操作图
环土壤菌悬液,在平板一边划第一道平行线2~3条,转动
培养皿约70度角,用烧灼过的接种环,待冷却后,接种
环从第一道线划过做第二道平行线,同法划第三道平行
线,如此划第四道平行线(如图14、15)。每种培养基划
线一套。
(2)曲线划线法:其它操作如同直线法,只是划线
是划成曲线。每种培养基划线一套。
(3)划线完后,把平皿倒置放在30℃下培养,细菌
分离要培养24~48h,放线菌分离要培养5~7d;霉菌分离
要培养3~5d。观察生长的菌落(图5-3),再作进一步的图17划线分离出的细菌单菌落
分离纯化或直接挑取单个菌落接入斜面培养后保存备用。
3、挑取单菌落进一步划线或涂布纯化。
【实验结果】
记录本实验结束后有无微生物生长,微生物主要种类及菌落形态特征。
【注意事项】
1、分离纯化操作全过程要在无菌室或超净工作台内进行。
2、划线时时,接种环要圆滑;接种环与平板成45°角,用手腕力轻巧地在平面上滑
动,避免划破培养基;防止在空间划线。
【实验思考题】
12:.
1、比较细菌、放线菌、霉菌分离菌落的不同。
2、划线分离过程中,划完第一道线后再划第二道线时,为什么接种环要在火焰上烧灼
冷却后再划线呢?
3、试设计从水果(如葡萄或雪梨)中分离酵母菌的实验。
13:.
实验四微生物的接种技术
【目的要求】
;
。
【基本原理】
接种就是在灭菌条件下,用接种工具(针、环)(如
图18)从一支原菌种中挑取少许菌体,接入到另一支新的
培养基上进扩大培养的技术。接种就是在灭菌条件下,用
接种工具(针、环)从一支原菌种中挑取少许菌体,
接入到另一支新的培养基上进扩大培养的技术。图18接种工具
我们要想得到大量的菌种,适应生产,;;;
;
学要求,就要进行微生物的接种,扩大菌种数量。接
种因使用不同容器、不同的培养基,达到不同的目的,而有不同的接种方法,但是它们的基
本要求是相同的。通常接种都应在空气经过消毒灭菌过的“接种室”、或接种箱或超净工作
台内进行。
【实验用品】
,牛肉膏蛋白胨斜面培养基等。
%酒精或1:50的新法尔天水溶液。
,接种针(环),接种工具、酒精灯等。
【方法步骤】
(一)准备工作
,然后每立方米体积用5~10毫升福尔马林盛
在容器中加热熏蒸或者是用1/10的福尔马林重量的高锰酸钾加到盛有福尔马林的容器中,
不用加热,亦可进行熏蒸;也可用5%的石炭酸喷务灭菌;用紫外灯照射20~30min。也可达
到灭菌的目的。应注意,要把接种时要所需的用具(如接种针(环),酒精灯等)及培养基
放入接种箱(室)一起灭菌消毒,但是菌种不能放入,以免死。超净工作要预先通风,紫外
线照射30min方可使用。
,再用75%酒精或新洁尔灭擦两手,菌种试管表面同样要
用酒精或新洁尔灭抹擦后才放入接种室(箱内)。
(二)接种技术
1、斜面菌种接种技术(从斜面培养基上的菌
种接种至另一新的斜面培养基上的方法)。
(1)准备工作就绪后,点然酒精灯。
14:.
(2)将菌种和斜面培养基的两支试管用大拇指和其他四指握在左手中,使中指拉于两
试管之间的部分,斜面向上,并使它们拉于水平位置,也可将试管放在左手掌中,用手指托
住试管。
图19手持2支试管的接种方式
(3)先将棉塞用右手拧转松动,便以接种时
拔出。
(4)右手拿接种环(拿的方法就和拿钢笔一样),在火焰上将环的部分烧红灭菌。环
图20斜面接种时的无菌操作
(1)接种灭菌(2)启开棉塞(3)管口灭菌(4)挑取菌落(5)接种(6)塞上棉塞
以上凡是在接种时可能进入试管的部分,均应用火烧过(如图20)。
以下操作都要把试管口靠近火焰旁进行。
(5)用右手小指、无名指和手掌拔掉棉塞(如图20)。
(6)用火焰灼烧管口,灼烧时应不断转动试管口(靠手腕的动作,使试管口沾染的小
量菌得以烧死)。(如图20)。
(7)将烧过的接种针(环)触动没有长菌的培养基部分,使其冷却,以免烧死被接种
的菌体,然后轻轻接触菌体,取出少许,慢慢将接种针(环)抽出试管(如图20)。
(8)迅速将接种针(环)在火焰旁无菌区伸进另一试管,在培养基斜面上轻轻划线,
在上面接细菌,划线时要由底部划到顶部,由上而上,划线可划之字形,或划几条直线,但
都不要把培养基划破,也不要使菌种沾污管壁(如图20)。
(9)将接种针(环)抽出,灼烧试管口,并在火焰旁将棉塞塞上。塞棉塞时,不要用
试管去迎棉塞,以免试管在运动时纳入不洁空气(如图20)。
(10).把针(环)在火焰上再灼红灭菌,放下接种钟(环)后,再腾出手来将塞塞紧。
(如图20)。
(11)全部培养基接种完毕后,要将试管斜面培养基包扎好,并标明姓名、时间和菌
种名称;整理好接种室(箱)的台面,搞好清洁卫生。
2、液体接种技术(由斜面菌接入液体培养基内或液体菌种接入液体培养基)
15:.
(1)准备工作和操作方法与前相同,但可使试管向上略斜,以免培养液流出。
(2)将取得菌种的接种环送入液体培养基时,可使环在液体表面与管壁接触的部分轻
轻摩擦。接种后塞棉塞,将试管在手掌中轻轻摇动,使菌体在培养基中分散开来。
(3)由液体菌种接种液体培养基时,接种用无菌滴管或移液管,接种量通常为培养液
体积的1/10。无菌操作的注意事项与前相同,只是移液管不同于接种针,系由玻璃做成,它
不能在火焰上灼烧,接种前在火焰上迅速通过一两
次即可。
3、穿刺接种技术(深层柱形固体培养基的接种技术)
(如图21)
(1)取两支新鲜半固体牛肉膏蛋白胨深层柱状
培养基,做好标记(写上菌种名、接种日期和接种
人等)。
(2)接种的方法是,用接种针沾取少量待接菌
种,然后从柱状培养基的表面中心穿入其底部(但
不要穿透),然后沿原刺入路线抽出接种针,注意接
图21斜面穿刺接种
种针不要移动。
以上接好种的材料置于30℃下培养24~48h。
【实验结果】
培养后取出试管,观察菌种生长情况,检查是否有杂菌生长,评价无菌操作的效果。
【注意事项】
1、菌种取出后,接种针(环)不要通过火焰、以免烧死菌体。
2、斜面接种时,不要使接种针(环)的碰到管壁;不要划破培养基,但也不能在试管
空间划,一定要接触到斜面表面上划线接种。
3、接种前的准备和接种过程都要有无菌概