实验一——鸡胚成纤维细胞的培养绪论.ppt

第一讲鸡胚成纤维单层细胞的制备与培养——预防兽医微生物组实验目的 、设备 ,生物性状尚未发生很大变化,具备二倍体的遗传性、来源方便等优点而广泛应用于病毒学、细胞分化、药物测试等试验。在禽类原代细胞培养中,鸡胚成纤维细胞(chickenembryo fibroblast ,CEF) 得到普遍应用。 CEF 的培养是在一定的条件下,在体外模拟体内生理环境,使从体内取出的成纤维组织细胞生存、生长和传代,并维持原有组织细胞的结构和功能特性。与其他细胞相比, CEF 相对容易获得,而且增殖能力强,适应性强,具有良好的耐受性,性状比较稳定,不易发生转化,所以被广泛地应用于分子和细胞生物学研究,以及疫苗的生产。实验材料?预加 10%FCS 和双抗的 1640 培养液; 消化液(% 胰蛋白酶- %EDTA 溶液); D-Hanks 平衡盐溶液; ?灭菌培养皿、青瓶、细胞培养瓶各 1个; ?巴氏吸管若干支、纱布若干;眼科镊 1把,剪刀 1把; ?碘酒, 75%酒精棉球;酒精灯 1台;废液缸。实验设备(1) 37 ℃-CO 2培养箱(2)倒置显微镜(3)超净台实验步骤 9-11 日龄鸡胚于蛋架上,先后用碘酒和 75% 酒精消毒气室部外壳。用无菌眼科镊子击破该部位的蛋壳和卵膜,撕破尿囊膜和羊膜,并轻轻夹住鸡胚颈部取出鸡胚,放入无菌平皿中。 1气室 2卵壳 3卵黄囊 4卵白 5 尿囊腔 6绒毛尿囊 7胚胎 8羊水腔 9胚胎外腔 2. 剪碎用灭菌剪刀剪去鸡胚头部、腿部、翅膀和内脏,留下躯干组织。用 D-Hanks 液冲洗,除去血液后移入灭菌青瓶中,用灭菌剪刀尽量剪碎( 1mm 3小块), 再用D-Hanks 冲洗 2次直至组织发白为止,然后将洗液上清吸弃。 ,加入大约 4倍量的胰酶(5-6mL) ,于 37℃温箱内消化 15-20min ,视其组织碎块变松散( 聚合成一团、边缘毛样模糊)即可。轻轻吸出消化液,用 D-Hank ’s洗1-3 次。 1640 营养液,用巴氏吸管反复吹吸数次, 使细胞分散,制成细胞悬液。静置 1分钟,使未冲散的组织块沉淀,吸出细胞悬液于 20mL 营养液中。重复 3 次收集细胞悬液,直至鸡胚发白为止。将纱布置于细胞瓶口,用吸管吸取细胞悬液滤过至细胞瓶中(注意不要将悬液溢出)。 ℃-CO 2温箱内培养。 24-48h 后可长成单层细胞。实验结果 1、观察原代细胞的形态和生长状况; 2、如出现细胞培养液浑浊情况,请鉴别是否细菌污染。