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实验五、3,5-二硝基水杨酸法测定蔗糖酶活力_图文-课件(PPT演示稿).ppt

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实验五蔗糖酶的活力测定实验目的: ?掌握 3,5 二硝基水杨酸测定还原糖的原理和方法?掌握酶的活力测定及其计算方法实验原理: ?蔗糖酶是一种水解酶,它催化蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖。?本实验利用 3,5- 二硝基水杨酸溶液与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物。在一定浓度范围内,还原糖的量与棕色物质颜色深浅程度成一定比例关系,可用分光光度计进行测定。?酶活力单位:在 35℃, 乙酸钠缓冲液( )中每分钟能使 % 蔗糖溶液释放 1 mg 还原糖的酶量定义为一个活力单位( U)。试剂与器材?蔗糖酶溶液?5% 的蔗糖溶液? DNS 试剂( 3,5 二硝基水杨酸试剂) ? 1mg/ml 的葡萄糖标准液试剂器材?微量移液器?移液管?刻度试管?水浴锅?分光光度计?比色杯?卫生纸操作步骤? A540 0葡萄糖含量/mg 定容至 10ml 蒸馏水/ml 沸水浴中煮沸 5min ,取出,冷却至室温 DNS 试剂/ml 0 蒸馏水/ml 0 标准葡糖溶液/ml 543210 管号试剂?以葡萄糖( mg )含量为横坐标, A540 值为纵坐标,绘出工作曲线。制作工作曲线的注意事项?,光吸收值 A应在 ~ 之间, 否则,缩小或加大样品的稀释倍数,重测! ?: 向杯中加样品时,注意加样到比色杯的 2/3 处; 如样品外溢,用卫生纸向一个方向擦至透明; 测定样品时,从浓度低到高测定; 测定完成后,一定用洗瓶中的蒸馏水洗干净,然后倒置在滤纸上吸干; 任何情况下都不许把比色杯放在仪器盖上!

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