氨基酸的薄层层析实验报告.docx

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南方便科大学
生物化学实验报告
姓 名： XXXXX
学 号： XXXXXXXXXXXXXX
专业年级： XXXXXXXXXXXXXXX
组 别： 第X实验室
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称 氨基酸的薄层层析
实验日期 XXXX-XX-XX 实验地点 第X实验室
合作者 XXXX 指导老师 XXX
评分 教师签名 批改日期
一、实验目的
1、掌握薄层层析法的实验原理。
2、掌握氨基酸薄层层析法的基本操作方法。
3、掌握如何根据移动速率（R值）来鉴定被分离的物质（即氨基酸混合液）的方法。
二、实验原理
1、薄层层析法是色谱分析技术的一种。
是将吸附剂、载体或其他活性物质均匀涂铺在平面板（如玻璃板、塑料片、金属片等）
上，形成薄层（）后，在此薄层上进行层析分离的分析方法。
一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。当液相（展开溶剂）在固定相
上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的 吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的 溶解 度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的 移动速率也不同，因而可以彼此 分开。（即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行，而将样品各组分分离开来） 硅胶吸附薄层层析：
吸附薄层中常用的吸附剂为 氧化铝和硅胶。硅胶：表达式为SiO2 • XH2O层析用硅胶是
一种多孔性物质，它的硅氧环交链结构表面上密布极性 硅醇基（-Si-OH,这种极性 的硅醇基能和许多化合物形成氢键而产生吸附.
硅胶吸附薄层层析的特点：
② 硅胶的吸附能力比氧化铝稍弱，其吸附活性也与含水量呈负性相关。
② 硅醇基显较弱的酸性，因此，硅胶只能用于中性、或酸性成分的分离，碱性成 分不能用它分离。
③ 硅胶的活化温度通常为105c — 110C,不能过高。
2、氨基酸与西三***的显色反应：
西三***水化后生成水化西三***，它与氨基酸的竣基反应生成还原西三***、氨及醛，与此
同时，还原西三***又与氨及苗三***缩合生成 紫红化合物而使氨基酸斑点显色。
3、混合氨基酸被分离后在薄层层析图谱上的位置用相对迁移率一 R值（rate of flow ）
来表示。
层析中，物质沿溶剂运动方向迁移的距离与溶液前沿的距离之比为 R值。
即：
原点到层析斑点中心的距离 Rf =
原点到斑点对应前沿的距离
由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的，故移动速率（ R值）也是恒定的，因
此可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。
三、材料与方法：
（一）、材料：分析样品（氨基酸混合液）、吸附剂（硅胶）、粘合剂（%的竣***纤
维素钠）、氨基酸的异丙醇溶液（丙氨酸、精氨酸、甘氨酸）、展开-显色剂（正丁醇、
乙酸、水、苗三***溶液）；
（二）、器材：层析板（5cmX 15cmj）＞尺子、铅笔、小烧杯、玻棒、量筒（10ml）、吹风
机、毛细玻璃管、层析缸、药匙、烘箱；
（三）、方法：
1、实验流程：
2、操作步骤:
(1)薄层板的制备:
(2)点样:
(3)层析:
将薄层板点样端浸入展层-显色剂，展层