多管发酵法测定水中大肠菌群课件.ppt

多管发酵法测定水中大肠菌群
多管发酵法测定水中大肠菌群
一、试验目
二、试验原理
三、试验材料
四、试验步骤
五、试验汇报
一、试验目
1、学****测定水中大肠菌群数量多管发酵法。
2、了解大肠菌群数量在饮水中关键性。
发酵法: 又称多管发酵法或三步发酵法
1) 初发酵（推测试验）:
将不一样稀释度水样, 分别接种于含有乳糖等糖类培养液中（3倍或1倍乳糖液）, 经37 ºC培养24 h, 观察产酸产气情况, 培养基内加有溴甲酚紫作为PH指示剂, 细菌产酸后, 培养基即由原来紫色变为黄色, 以初步判定是否有大肠菌群存在。
二、试验原理
2）平皿分离（证实试验）
水中除大肠菌群外, 还有其它细菌可能引发糖类发酵, 所以需要深入证实。
将初发酵管中已发酵菌液接种于伊红美兰培养基, 37 ºC培养24 h, 依据菌落特征（带关键、有金属光泽深紫色菌落）, 挑取可能为大肠菌群菌落制片, 经革兰氏染色, 深入证实是否为大肠菌群。
3） 复发酵试验(完成试验）
将上述可能为大肠菌群菌落再次转接入1倍乳糖培养液中, 经37 ºC培养24 h, 产酸产气者即最终确证为存在大肠菌群。
产酸、产气分别记为阳性反应, 不产酸、产气则记为阴性反应;
依据阳性管数量, 查表求得水体大肠菌群数量。
三、试验材料
1、培养基:
乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小套管）, 三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（瓶）（内有倒置小套管）, 伊红美蓝琼脂平板, 灭菌水。
2、仪器或其她用具:
载玻片, 灭菌带玻璃塞空瓶, 灭菌吸管, 灭菌试管等。
四、操作步骤
1．水样采取 试验室提供水样
2．河水检验
（1）初（步）发酵试验
水样稀释: 10-1与10-2
接种: 分别吸收1ml 10-2 、 10-1和原水样接入装有10ml一般浓度乳糖蛋白胨发酵管 ; 另取10ml原水样接入装有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管 , 混匀后, 37 ℃培养24 h, 24 h未产气继续培养48 h。
（2）平板分离
将经24 h和48 h培养后产酸产气发酵管, 分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上, 再于37 ℃培养18～24 h, 将符合下列特征菌落进行染色镜检。
深紫黑色, 有金属光泽;
紫黑色, 不带或略带金属光泽;
淡紫红色, 中心颜色较深。
（3）复发酵试验
将镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌菌株反复初步发酵试验。并依据初发酵管试验阳性管查表, 即得大肠菌群数。