多管发酵法测定水中大肠菌群.docx

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多管发酵法测定水中大肠菌群
、目的要求
1 .学****测定水中大肠菌群数量的多管发酵法
2 蛋白陈发酵管（瓶）（内有倒置小套管），伊红美蓝琼脂平板，灭菌水；
载玻片，灭菌带玻璃塞空瓶，灭菌吸管，灭菌试管等。
四、操作步骤
1 .水样的采取
同实验五十九。
2 .自来水检查
（1）初（步）发酵试验在2个含有50ml三倍浓缩的乳糖蛋白陈发酵烧瓶中，各加入100ml水样。在10支含有5ml三倍浓缩乳糖蛋白陈发酵管中，各加入10ml水样（如图XIV-1）。混匀后，37c培养24小时，24小时未产气的继续培养至48小时。
（2）平板分离经24小时培养后，将产酸产气及48小时产酸产气的发酵管（瓶），分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于37c下培养18—24小时，将符合下列特征的菌落的一小部分，进行涂片，革兰氏染色，镜检。
（a）深紫黑色、有金属光泽。
（b）紫黑色、不带或略带金属光泽。
（c）淡紫红色、中心颜色较深。
（3）复发酵试验经涂片、染色、镜检，如为革兰氏阴性无芽抱杆菌，则挑取该菌落的另一部分，重新接种于普通浓度的乳糖蛋白陈发酵管中，每管可接种来自同一初发酵管的同类型菌落1—3个，37C培养24小时，结果若产酸又产气，即证实有大肠菌群存在。
证实有大肠菌群存在后，再根据初发酵试验的阳性管（瓶）数查表XIV-2,即得大肠菌群数。
表xivr大J&菌群检数去
接种水样总量如小虱(1。01山柳，1口同10份)
水量的阳性管致
0
1
2
每升水祥中
每升水禅中
短升水样中
10ml水星的阳性管
大肠菌曾寓
趣菌群数
大肠菌群数
0_
<3
4
11
1
3
£
1S
2
7
13
27
3
11
33
4
14
24
立
5
30
加
6.
22
36
92
7
2T
43
120
g
31
堂
⑹
9
36
60
230
10
41
>230
3 .池水、河水或湖水等的检查
(1)将水样稀释成10-1与10-2。
(2)分别吸取1ml10-2、101的稀释水样和1ml原水样，各入装有10ml普通浓度乳糖蛋白陈发酵管中。另取10ml和100ml原水样，分别注入装有5ml和50ml三倍浓缩乳糖蛋白陈发酵液的试管(瓶)中。
(3)以下步骤同上述自来水的平板分离和复发酵试验。
(4)将100、10、1、(10-1)ml水样的发酵管结果查表XIV-3,将10、1、(10-1)、(10-2)ml水样的发酵管结果查表XIV-4,即得每升水样中的大肠菌群数。
表XIY-3大跖菌群检数表
接种泳样总量ULlml（100ml、10ml、）
接种水样量（ml）
每升水样中
大肠菌辞数
100
10
1

—
—
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<9
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一
一
+
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一
+
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