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多管发酵法测定水中大肠菌群
一、目的要求
1．学****测定水中大肠菌群数量的多管发酵法。
2．了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。
二、基本原理
多管发酵法包括初（步）发酵多管发酵法测定水中大肠菌群
一、目的要求
1．学****测定水中大肠菌群数量的多管发酵法。
2．了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。
二、基本原理
多管发酵法包括初（步）发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
1．初（步）发酵试验
发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管。乳糖
能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产
酸产气。为便于观察细菌的产酸情况，培养基内加有溴甲酚紫作为 pH 指
示剂，细菌产酸后，培养基即由原来的紫色变为黄色。溴甲酚紫还有抑制
其他细菌如芽胞菌生长的作用。
水样接种于发酵管内，37℃下培养，24 小时内小套管中有气体形成，
并培养基且 混浊，颜色改变，说明水中存在大肠菌群，为阳性结果，但也
有个别其他类型的细菌在此条件下也可能产气；此外产酸不产气的也不能
完全说明是阴性结果。在量少的情况下，也可能延迟到 48 小时后才产气，
此时应视为可疑结果，因此，以上两种结果均需继续做下面两部分实验，
才能确定是否是大肠菌群。48 小时后仍不产气的为阴性结果。
2．平板分离
平板培养基一般使用复红亚硫酸钠琼脂（远藤氏培养基，Endo＇s
medium）或伊红美蓝琼脂（eosin methylene blueagar，EMB agar），前
者含有碱性复红染料，在此作为指示剂，它可被培养基中的亚硫酸钠脱色，
使培养基呈淡粉红色，大肠菌群发酵乳糖后产生的酸和乙醛即和复红反应，
深红色复合物， 使大肠菌群菌落变为带金属光泽的深红色。亚硫酸钠
还可抑制其他杂菌的生长。伊红美蓝琼脂平板含有伊红与美蓝染料，在此
亦作为指示剂，大肠菌群发酵乳糖造成酸性环境时，该两种染料即结合成
复合物，使大肠菌群产生与远藤氏培养基上相似的、带核心的、有金属光
泽的深紫色（龙胆紫的紫色）菌落。初发酵管 24 小时内产酸产气和 48
小时产酸产气的均需在以上平板上划线分离菌落。
3．复发酵试验
以上大肠菌群阳性菌落，经涂片染色为革兰氏阴性无芽胞杆菌者，通
过此试验再进一步证实。原理与初发酵试验相同，经 24 小时培养产酸又
产气的，最后确定为大肠菌群阳性结果。三、器材
乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小套管），三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管
（瓶）（内有倒置小套管），伊红美蓝琼脂平板，灭菌水；
载玻片，灭菌带玻璃塞空瓶，灭菌吸管，灭菌试管等。
四、操作步骤
1．水样的采取
同实验五十九。